Метиленовый синий
Methylene blue. American Journal of Therapeutics
https://pismin.com/10.1097/00045391-200307000-00009
Метиленовый синий (МС) – одно из самых необычных лекарств в современной медицине. Известное многим как простой краситель, это вещество обладает впечатляющим спектром медицинских эффектов и используется для решения серьёзных проблем со здоровьем. Авторы Джек Клифтон и Джерролд Лейкин подробно рассказали о том, как именно это вещество влияет на организм.
Главная роль: спасение от метгемоглобинемии
Одной из основных областей применения метиленового синего является лечение метгемоглобинемии – состояния, при котором гемоглобин крови превращается в неспособную переносить кислород форму – метгемоглобин. Человек буквально начинает задыхаться на фоне нормального дыхания, так как кровь перестает эффективно доставлять кислород к тканям.
Метиленовый синий помогает решить эту проблему, восстанавливая метгемоглобин обратно в полезный для дыхания гемоглобин.
Как это работает?
Метиленовый синий становится своеобразным «посредником», помогая ферментам эритроцитов восстановить нормальный гемоглобин. Он принимает электроны от NADPH и превращается в «лейкометиленовый синий», который и помогает вернуть метгемоглобин к нормальной форме.
Как правильно применять метиленовый синий?
При метгемоглобинемии метиленовый синий вводят внутривенно, обычно в дозе 1-2 мг на килограмм массы тела, что позволяет снизить уровень опасного метгемоглобина уже за 30 минут.
При тяжелых состояниях доза может повторяться, но следует соблюдать осторожность, так как в больших дозах метиленовый синий сам может стать токсичным.
Когда метиленовый синий может быть опасен?
Несмотря на свою эффективность, метиленовый синий не так безобиден, как кажется на первый взгляд. Вот несколько примеров потенциальной токсичности:
Гемолитическая анемия: в высоких дозах (более 4 мг/кг) может вызвать разрушение эритроцитов, особенно у людей с недостаточностью фермента G6PD. Это опасное состояние проявляется образованием так называемых «телец Хайнца» (поврежденных эритроцитов).
Проблемы у новорожденных: младенцы особенно чувствительны к токсическим эффектам метиленового синего. У них он может вызывать желтуху, проблемы с дыханием и даже сильную анемию.
Ложные показания пульсоксиметра: метиленовый синий искажает работу датчиков измерения кислорода в крови, показывая неверно низкий уровень насыщения кислородом.
Неожиданные применения метиленового синего
Кроме классического применения при метгемоглобинемии, метиленовый синий проявляет себя и в других ситуациях:
Лечение энцефалопатии: успешно используется для предотвращения и лечения энцефалопатии, вызванной ифосфамидом (лекарством, применяемым при химиотерапии).
Поддержка при септическом и анафилактическом шоке: за счёт повышения тонуса сосудов и улучшения работы сердца.
Это говорит о том, что препарат влияет не только на кровь, но и на более глубокие механизмы клеточной энергетики и метаболизма.
Фармакокинетика: путь в организме
Как ведет себя метиленовый синий внутри тела?
Всасывается при пероральном приеме довольно эффективно (от 53% до 97%).
Максимальный эффект наступает через 30 минут после введения.
Выводится через желчь, кал и мочу, преимущественно в виде лейкометиленового синего.
Важные выводы для врачей и пациентов
Метиленовый синий — незаменимое лекарство при острых отравлениях и критических состояниях (например, метгемоглобинемия).
Требует строгого контроля за дозировкой и особого внимания к пациентам с особыми состояниями (G6PD-дефицит, почечная недостаточность).
Способ введения (внутривенный или пероральный) сильно влияет на концентрацию препарата в разных органах.
Исследование подчёркивает важную истину современной медицины: одно и то же вещество может быть как лекарством, так и ядом – всё зависит от дозы и правильности применения. Метиленовый синий – яркий пример того, как грамотное использование старого и хорошо изученного препарата может спасти жизнь, а неправильное – привести к тяжелым последствиям.
«PharmGKB summary: methylene blue pathway», Ellen M. McDonagh и др.
Pharmacogenetics and Genomics, 2013
https://pismin.com/10.1097/FPC.0b013e32836498f4
В центре внимания исследователей была фармакогенетика - наука, объясняющая, почему люди с разной генетикой по-разному реагируют на лекарства. Конкретно авторов интересовало, почему метиленовый синий, отлично помогающий при метгемоглобинемии (состоянии, когда кровь не может переносить кислород), в то же время опасен для пациентов с дефицитом фермента глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (G6PD).
Что делает метиленовый синий в организме?
Метиленовый синий - это редокс-активное соединение, способное принимать и отдавать электроны. В организме он действует как электронный посредник, участвующий в восстановлении окисленных молекул, в том числе метгемоглобина - формы гемоглобина, которая не может переносить кислород.
Механизм действия при метгемоглобинемии (в норме)
- В организме МС восстанавливается до лейкометиленового синего (LMB) при помощи фермента NADPH-метгемоглобинредуктазы.
- Этот восстановленный LMB передаёт электрон метгемоглобину (Fe³⁺), превращая его в обычный гемоглобин (Fe²⁺), способный переносить кислород.
- Для восстановления метиленового синего в лейкоформу используется NADPH, который образуется в эритроците только через пентозофосфатный путь (PPP).
- Главный фермент этого пути - глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа (G6PD).
То есть: без NADPH → нет лейкоформы → нет восстановления гемоглобина.
Эритроцит не может вырабатывать достаточное количество NADPH.
Восстановление МС до его активной формы невозможно.
Более того, МС сам по себе становится окислительным стрессором, усиливая повреждение эритроцитов.
Это приводит к гемолизу - разрушению красных кровяных клеток — и может вызвать тяжёлую анемию, иногда даже с летальным исходом.
Что это значит для других систем организма?
Хотя основное применение МС - при метгемоглобинемии, он также исследуется для:
- нейропротекции при болезни Альцгеймера,
- контроля сосудистого тонуса.
Во всех этих случаях роль митохондрий, NADPH и общего окислительного статуса клеток критически важна, и поэтому генетические различия, влияющие на клеточный редокс-баланс, могут менять реакцию на МС.
Метиленовый синий эффективен, но не универсален.
Генетический скрининг на дефицит G6PD должен быть обязательным, особенно в экстренных ситуациях (токсические отравления, септический шок).
Нельзя рассматривать МС как безобидное средство — у определённых пациентов он превращается из лекарства в яд.
"Effect of methylene blue on cardiac output response to exercise in dogs" (J. Appl. Physiol., 1986)
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/3804909/
Выяснить, влияет ли тканевый редокс-потенциал (соотношение NADH/NAD⁺) на увеличение сердечного выброса во время умеренной физической нагрузки.
Если проще, почему сердце начинает работать активнее, когда мы занимаемся физической активностью?
Одна из старых теорий предполагала, что всё дело в изменении химического баланса в тканях - в частности, в так называемом редокс-потенциале, который можно оценить по соотношению лактат/пируват в крови.
Чтобы проверить это, исследователи использовали метиленовый синий - вещество, которое может снизить редокс-потенциал, по сути, мешая накоплению восстановленных форм NADH (одного из важных энергетических переносчиков в клетках).
Группа 1 - получала физраствор, затем выполняла упражнение на беговой дорожке. Получала обычный физраствор.
Группа 2 - получала метиленовый синий до и во время тренировки, затем выполняла ту же нагрузку.
Группа 3 - Получала метиленовый синий, но не бегала - служила в качестве контрольной группы, чтобы посмотреть, как МС действует сам по себе.
Испытуемые: собаки массой 16.2–26 кг
Режим: два этапа бега на беговой дорожке (по 20 минут, 2.5 и 5.0 миль/ч, наклон 6%)
4 мг/кг, введённая внутривенно перед началом упражнения
Поддерживающая инфузия во время тренировки:
0.15 мг/кг/мин на протяжении всей тренировки
(вливание осуществлялось через левое предсердие в объёме 0.38 мл/мин)
- Сердечный выброс (объём крови, который сердце выталкивает)
- Общее потребление кислорода организмом
- Соотношение лактат/пируват в крови (показатель редокс-потенциала)
- Частоту сердечных сокращений, давление, силу сокращения сердца
- Уровни гормонов стресса: адреналина и норадреналина
Без метиленового синего (Группа 1):
При беге у собак вырос и сердечный выброс, и потребление кислорода.
Также увеличилось соотношение лактат/пируват — то есть ткани переходили к более восстановленному состоянию (больше NADH).
С метиленовым синим (Группа 2):
Сердце работало так же активно, как и у первой группы.
Но! Соотношение лактат/пируват не выросло — МС это остановил.
Значит, редокс-сдвиг не нужен для увеличения работы сердца при нагрузке.
МС немного повысил потребление кислорода, но не повлиял на сердце или гормоны.
Лактат/пируват уменьшился, как и ожидалось, но сердце не отреагировало.
Теория, что сердце включается в активный режим из-за изменения клеточного “баланса электронов” (редокс-потенциала), не подтверждается.
Сердце реагирует на физическую активность по другим механизмам - возможно, через нервные сигналы от мышц, метаболические сигналы вроде распада АТФ и других метаболитов.
Это также показывает, что кардиорегуляция - сложный и многокомпонентный процесс, который нельзя объяснить одной-единственной переменной вроде NADH/NAD⁺.
Ранее считалось, что метиленовый синий может "выключать" реакцию сердца на нагрузку. Но это наблюдалось в экспериментах на анестезированных животных, где использовалась электрическая стимуляция мышц, а не реальная нагрузка. Это исследование показывает, что у сознательных животных при настоящем беге всё работает иначе. (Кто ещё в очередной раз расскажет, что знает как всё работает наверняка)
"From Mitochondrial Function to Neuroprotection—an Emerging Role for Methylene Blue" (Tucker et al., 2017, Molecular Neurobiology)
Обзор: Метиленовый синий — от митохондрий к нейропротекции
https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC5826781/
Рассмотреть метиленовый синий (MB) как перспективное средство для нейропротекции — защиты мозга при:
а также при старении и когнитивном снижении
В статье есть большая таблица (Table 1), где авторы сводят данные более чем 70 публикаций и систематизируют:
- при каких заболеваниях метиленовый синий был эффективен,
- какие механизмы задействованы,
- какие наблюдались эффекты.
Наблюдаемые эффекты: улучшение когнитивной функции, нейропротекция, снижение амилоидной и тау-патологии.
Механизмы: ингибирование Aβ-олигомеризации, ↓ β-секретаза, ↑ активности комплекса IV, ↓ окислительный стресс, ↑ кровоток.
Наблюдаемые эффекты: снижение объёма инфаркта, сохранение BBB, улучшение неврологических исходов.
Механизмы: ↑ митофагия, ↓ воспаление, ↑ комплекс IV, активация Akt и GSK-3β.
Наблюдаемые эффекты: неврологическое улучшение, защита митохондрий.
Механизмы: обход повреждённого комплекса I, активация альтернативного переноса электронов.
Наблюдаемые эффекты: ↓ отёк, ↓ глиоз, ↑ нейровосстановление.
Механизмы: подавление воспаления, индукция аутофагии.
MB принимает электроны от комплекса I.
Переносит их напрямую к комплексу III, обходя участки с высоким ROS-утечкой.
Это снижает окислительный стресс и повышает эффективность дыхательной цепи
Inhibition of nitric oxide synthesis by methylene blue» (Bernd Mayer, Friedrich Brunner, Kurt Schmidt, 1993
https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/0006295293900725
использовались in vitro и ex vivo модели, а не живые животные в классическом понимании.
Объекты исследования и методика:
Клетки: эндотелиальные клетки аорты свиней (porcine aortic endothelial cells)
Метод: измерение концентрации цГМФ в клетках после стимуляции ионнофором кальция (A23187), а также после воздействия доноров NO (SNP, GSNO).
Цель: сравнить чувствительность различных источников NO к ингибированию MB
Ткань: коронарные артерии крупного рогатого скота (bovine coronary arteries)
Метод: измеряли степень вазодилатации под действием A23187 и GSNO, с/без MB и супероксиддисмутазы (SOD)
Фермент: очищенная NO-синтаза из мозжечка свиней
Метод: измеряли образование L-цитруллина и активацию гуанилатциклазы как маркеры NO-продукции
Полное ингибирование NO-синтазы наблюдалось при 30 мкМ MB
Для гуанилатциклазы IC₅₀ был значительно выше (~60 мкМ), что подтверждает, что MB преимущественно ингибирует именно NO-синтазу, а не только рецепторы NO.
L-цитруллин — продукт NO-синтазы, определялся радиоизотопным методом
цГМФ — как продукт активации гуанилатциклазы
Вазорелаксация — оценивалась на изолированных артериальных кольцах
Контроль через SOD — использовался для исключения действия супероксида
Исследователи решили проверить, как метиленовый синий влияет на синтез оксидa азота (NO). Оксид азота - это крошечная молекула, играющая важнейшую роль в нашем организме:
расслабляет сосуд,например увеличивая кровоснабжение мышц.
- улучшение доставки кислорода и питательных веществ к мышцам.
- ускорение выведения молочной кислоты и других метаболитов, вызывающих утомление.
- влияет на иммунитет и работу нервной системы
- усиление кровотока и доставка кислорода позволяют тренироваться дольше, уменьшая чувство усталости
- NO снижает воспаление и стимулирует заживление мышечных тканей, ускоряя восстановление после тренировок
- за счет улучшения кровоснабжения мышц увеличивается и «пампинг» (ощущение наполненности мышц кровью во время тренировки)
Раньше думали, что метиленовый синий действует в основном на фермент гуанилатциклазу — молекулу, которая активируется оксидом азота и усиливает его сосудорасширяющий эффект через цГМФ.
Но оказалось, всё не так просто.
Учёные провели ряд экспериментов:
- Изучали сосуды сердца (коронарные артерии)
Проверяли, как МС влияет на их способность расслабляться в ответ на стимулы. - Использовали культуру эндотелиальных клеток (внутренний слой сосудов)
Смотрели, как МС меняет концентрацию внутриклеточного сигнального вещества — цГМФ. - Работали с очищенными ферментами:
Оказалось, что метиленовый синий блокирует расслабление сосудов и повышение цГМФ намного эффективнее, когда этот процесс зависит от синтеза NO, а не от прямого действия веществ, которые активируют гуанилатциклазу напрямую (например, нитропруссида натрия).
Когда использовали очищенную NO-синтазу, метиленовый синий полностью остановил производство оксида азота и цитруллина (продукта реакции).
Сам же фермент гуанилатциклаза оказался менее чувствительным к МС. Максимальное ингибирование его активности составило всего 72%, даже при очень высоких концентрациях вещества.
Учёные сделали важное открытие: метиленовый синий не просто блокирует действие оксида азота на сосуды. Оказывается, он:
Прямо подавляет синтез NO, взаимодействуя с ферментом NO-синтазой.
Это ингибирование гораздо сильнее и важнее, чем его слабое действие на гуанилатциклазу, которое раньше считали основным.
Также выяснилось, что метиленовый синий действует не из-за генерации супероксид-аниона, как раньше предполагалось, а непосредственно влияя на фермент.
Эти данные заставляют пересмотреть роль метиленового синего в исследованиях и терапии. Если раньше его считали «селективным ингибитором гуанилатциклазы», то теперь ясно, что вещество влияет и на другие ключевые ферменты.
Эти результаты также помогают глубже понять молекулярные механизмы действия NO, который сегодня используют в кардиологии, неврологии и терапии множества других заболеваний.
"Spectrophotometric determination of methylene blue in biological fluids after ion-pair extraction and evidence of its absorption on plastic polymers"
European Journal of Clinical Pharmacology, 2000
https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0928098797000614
Разработать точный и чувствительный метод анализа метиленового синего (MB) в биологических жидкостях — плазме и моче — и проверить, не теряется ли MB при контакте с пластиком, как это предполагалось в предыдущих неудачных анализах.
Использован ионно-парный экстракционный метод с хлоридом тетрабутиламмония, далее — спектрофотометрия на 665 нм.
стабильность MC в разных условиях,
влияние пластика (пробирок и наконечников),
фармакокинетику MC у крыс после внутрибрюшинного введения (5 мг/кг).
1. Метод оказался чувствительным и точным
- Линейный диапазон определения MB: 0.05 – 5.0 мг/л
- Вариабельность метода (intra- и inter-assay CV) < 4%
- Лимит обнаружения: ~0.03 мг/л
2. MB сильно абсорбируется на пластик
- Из растворов MB, находящихся в пластиковых пробирках (Eppendorf и аналогах), терялось до 70% вещества в течение 60 мин.
- Особенно активно MB терялся при контакте с сухим или полуобезвоженным пластиком, что привело к значительным ошибкам измерений в рутинной практике.
- Прозрачные полипропиленовые пробирки → больше потерь, чем стеклянные.
Рекомендация авторов: использовать только стекло при работе с MC в низких концентрациях.
Введение: внутрибрюшинно (i.p.), доза 5 мг/кг
Количество животных: по 3 крысы на каждую точку (всего 12)
Пик концентрации - между 15 и 30 минутами
Концентрация MB постепенно снижалась, без признаков накопления или резкого метаболизма.
В биологических жидкостях MB присутствовал как:
окисленная форма (синяя) — MC,
восстановленная форма (бесцветная) — leucoMB.
Сама методика позволяла учитывать обе формы, если анализировать сразу после экстракции.
Присутствие MC даже в небольших количествах может окрашивать жидкость, но это не всегда отражает реальную концентрацию — нужен точный анализ.
- Разработанный метод точен, чувствителен и пригоден для фармакокинетических и клинических исследований MC.
- MC теряется при контакте с пластиком, особенно в низких концентрациях — это может исказить данные прошлых исследований.
- У крыс после i.p. введения 5 мг/кг MC быстро всасывается и достигает пика через 15–30 минут.
- Все анализы MC в биологических жидкостях следует проводить в стеклянной посуде, иначе — риск недооценки концентрации.
Methylene blue reduces aβ levels and rescues early cognitive deficit by increasing proteasome activity.
https://pismin.com/10.1111/j.1750-3639.2010.00430.x
Что такое метиленовый синий и почему его решили проверить?
Учёных заинтересовал метиленовый синий, потому что ранее он показал обнадёживающие результаты в небольшом клиническом исследовании, где у пациентов с Альцгеймером улучшились когнитивные функции. Однако механизм, с помощью которого он действует, оставался неизвестным.
Для изучения эффекта метиленового синего на болезнь Альцгеймера учёные использовали специально созданных генетически модифицированных мышей (модель 3xTg-AD). Эти мыши развивают схожие с человеческими симптомы Альцгеймера:
В исследовании, описанном в статье, метиленовый синий (MC) добавлялся в рацион мышей в концентрации 0.025% по весу (w/w), то есть 25 мг на 100 г корма. Пищу с добавкой предоставляли ad libitum (свободный доступ) в течение 16 недель, после чего проверяли, как изменилась их память, работа мозга и биохимические параметры.
3xTg-AD 17 мышей MC (0.025% w/w)
3xTg-AD 14 мышей Контрольная (без MC)
Всего: 54 мыши
Возраст на старте: 6 месяцев
Продолжительность: 16 недель
Результаты оказались очень интересными и обнадёживающими:
Мыши, которые принимали МС, значительно лучше справлялись с задачами на память и обучение, чем те, кто не получал препарат. После 16 недель лечения мыши с Альцгеймером по памяти практически не отличались от здоровых животных.
Снижение уровня токсичных белков
В мозге мышей, принимавших метиленовый синий, значительно снизился уровень бета-амилоида – токсичного белка, который считается главным виновником болезни Альцгеймера. При этом количество тау-белка (другого важного маркера болезни) не изменилось.
Новое понимание механизма действия
Учёные также обнаружили неожиданную и важную вещь: МС не влиял на выработку бета-амилоида, а усиливал работу протеасомы – особой внутриклеточной системы, которая разрушает и удаляет токсичные белки. Это важный механизм, позволяющий мозгу "очиститься" от опасных белков.
- Метиленовый синий увеличил две из трёх ферментативных активностей протеасомы (трипсиноподобную и химотрипсиноподобную).
- Интересно, что на аутофагию – ещё один важный механизм удаления токсинов – метиленовый синий не повлиял.
- Учёные также не нашли значительного влияния препарата на работу митохондрий (клеточных "энергетических станций"), несмотря на то что ранее предполагалось такое воздействие.
- Важна длительность лечения - эффект проявился только после 16 недель
Авторы исследования подчеркивают, что:
- Метиленовый синий показал обнадёживающий результат именно на ранних этапах болезни.
- Важно выяснить, будет ли аналогичный эффект на более поздних стадиях болезни, когда уже сформированы нейрофибриллярные клубки из тау-белка.
- Необходимо продолжить изучение оптимальной дозировки и длительности лечения.
Это исследование открывает дверь к более глубокому изучению метиленового синего как доступного и эффективного препарата для лечения болезни Альцгеймера. Ставит под вопрос влияния препарата на работу митохондрий. У здоровых мышей MC не улучшал когнитивные функции, но и не вызывал вреда - это говорит о его избирательной эффективности при патологии, а не при норме.
«Methylene Blue as a Cerebral Metabolic and Hemodynamic Enhancer» (Lin et al., 2012)
https://pismin.com/10.1371/journal.pone.0046585
Исследование преследовало две ключевые цели:
- Понять, может ли МС улучшить обмен веществ (метаболизм) и кровоснабжение мозга в нормальных условиях.
- Узнать, помогает ли МС защитить мозг в условиях кислородного голодания (гипоксии).
Исследование было проведено на двух типах выборок:
In vitro (клеточные и митохондриальные):
- Использовали изолированные митохондрии из мозга крыс.
- Использовали клеточную линию HT-22 (клетки гиппокампа мыши).
- Использовали крыс линии Sprague-Dawley для нейровизуализации (МРТ и ПЭТ).
Использование одновременно клеточных моделей и живых животных позволяет получить комплексную картину эффектов метиленового синего (МС), сочетая точность клеточных экспериментов и физиологическую реалистичность животных моделей.
Анализировались отдельные области мозга (гиппокамп, моторная, фронтопариетальная и поясная кора), что позволяет понять, как МС влияет именно на те области, которые чаще всего поражаются при болезнях Альцгеймера и Паркинсона.
В эксперименте in vivo были использованы относительно небольшие группы животных (по 6 крыс для каждой серии экспериментов).
В исследовании использовалась только одна доза препарата (0,5 мг/кг).
Эффекты МС оценивались в краткосрочном периоде (сразу после введения). Долгосрочные эффекты препарата не были оценены.
В нормальных условиях (нормоксия):
Метиленовый синий заметно повысил активность митохондрий, особенно комплексов I–III, ответственных за энергообмен.
МС значительно увеличил потребление кислорода и глюкозы клетками мозга, что свидетельствует о повышении общей активности клеток.
В живых крысах наблюдалось явное улучшение кровоснабжения мозга, особенно в зонах, отвечающих за память и движение (гиппокамп, моторная и фронтопариетальная кора).
В условиях кислородного голодания (гипоксия):
Без препарата кровоток и обмен веществ снижались, но введение МС позволило почти полностью восстановить эти показатели.
МС поддерживал уровень кислорода и глюкозы, необходимый для нормальной работы мозга даже в неблагоприятных условиях.
Tau Aggregation Inhibitor Therapy: An Exploratory Phase 2 Study in Mild or Moderate Alzheimer’s Disease (2015)
https://pismin.com/10.3233/JAD-142874
Основная задача - выяснить, может ли метиленовый синий (в форме метилтиониния, MT) замедлять прогрессирование болезни Альцгеймера за счёт ингибирования агрегации тау-белка, и какая минимальная эффективная и безопасная доза препарата при этом необходима.
Формат: двойное слепое, плацебо-контролируемое, рандомизированное исследование II фазы.
Участники: 321 пациент с лёгкой или умеренной стадией болезни Альцгеймера.
Продолжительность основной фазы: 24 недели, с последующим продлением до 50 и 102 недель (в расширенных фазах).
Параллельный субанализ: у 135 пациентов - измерение регионального кровотока в мозге с помощью SPECT (гамма-томографии).
69 мг/сутки (по 30 мг 3 раза в день)
138 мг/сутки (по 60 мг 3 раза в день)
228 мг/сутки (по 100 мг 3 раза в день)
(однако у этой дозы были проблемы с растворением и абсорбцией, что снизило её эффективность)
138 мг/день - минимально эффективная и безопасная доза:
У пациентов с умеренной деменцией (CDR = 2):
ADAS-cog: ухудшение на +4.35 пункта (то есть значительное снижение когнитивных функций).
MMSE: ожидаемо тоже снизился (хотя точное значение в таблице не указано, но в тексте указано, что ухудшение было статистически значимым).
MT 138 мг/день через 24 недели:
ADAS-cog: улучшение по сравнению с плацебо на −5.42 пункта (то есть фактически пациенты не ухудшились, а остались на том же уровне или даже немного улучшились).
MMSE: +3.79 пункта по сравнению с плацебо - это улучшение когнитивных функций (p = 0.0048; скорректированное p = 0.028).
У пациентов с лёгкой деменцией (CDR = 1):
Значительное замедление снижения мозгового кровотока по SPECT (разница с плацебо: +1.97%, скорректированное p < 0.001)
Не дал лучших результатов, несмотря на высокую дозировку.
Причина: капсулы плохо растворялись и усваивались (проблемы с биодоступностью при приёме с пищей).
Долгосрочный эффект (50 недель):
Пациенты, получавшие 138 мг/день, сохраняли улучшения без значимого снижения когнитивных функций (ADAS-cog почти не изменился).
В группе плацебо, переведённой позже на препарат, наблюдалось ухудшение когнитивного состояния (что подтвердило эффект раннего старта терапии).
Наиболее частые: диарея, дизурия, учащённое мочеиспускание.
Были дозозависимые изменения гемоглобина и количества эритроцитов, но без клинически значимой анемии.
Все побочные явления в основном были лёгкими или умеренными.
На ранней стадии болезни (лёгкая форма):
Препарат не влияет быстро на клинические шкалы, потому что пациенты ещё не начали резко ухудшаться.
Но уже замедляет невидимые глазу физиологические изменения в мозге, связанные с нарушением функции (по данным SPECT).
Эти функциональные улучшения в мозге через ~6 месяцев приводят к клинической пользе спустя ~12 месяцев.
Финансирование и конфликт интересов: исследование полностью профинансировано компанией TauRx Therapeutics, в которой несколько авторов являются акционерами или консультантами.
Исследование дало обнадёживающий сигнал, что метиленовый синий в дозе 138 мг/день действительно способен замедлить прогрессирование болезни Альцгеймера, особенно у пациентов с умеренной формой. Однако для однозначного подтверждения эффективности требуется независимое и более масштабное исследование III фазы, с улучшенной формой препарата (LMTX®), свободной от проблем с растворимостью и усвояемостью.
Methylene blue alleviates nuclear and mitochondrial abnormalities in progeria (2016)
https://pismin.com/10.1111/acel.12434
Синдром Хатчинсона–Гилфорда (HGPS) - редкое генетическое заболевание, при котором дети стареют в 10 раз быстрее обычного. Причиной служит мутантный белок прогерин, который нарушает форму ядра, повреждает митохондрии и вызывает смерть клеток.
Выявить, какие именно дефекты митохондрий происходят при HGPS.
Проверить, может ли метиленовый синий (MC) улучшить митохондриальную и ядерную функцию.
Использовались фибробласты кожи человека: нормальные и HGPS.
Применялись методы: микроскопия, конфокальная визуализация, TEM, FACS-анализ, RT-PCR, RNA-seq и т.д.
MC применяли в концентрации 100 нМ, в течение 12 недель.
Проводился параллельный анализ ядерных и митохондриальных функций.
1. Ядерные нарушения (характерные для HGPS)
У клеток с прогерином наблюдаются:
- Потеря перинуклеарного гетерохроматина.
- Нарушенная экспрессия тысяч генов.
- Повышает растворимость прогерина и возвращает его в нуклеоплазму.
- Восстанавливает уровни HP1α - маркера гетерохроматина.
- Корректирует экспрессию более 50% нарушенных генов.
2. Митохондриальные дефекты в HGPS
Повышен уровень ROS и супероксидов.
Митохондрии становятся фрагментированными и отёчными, плохо движутся по цитоскелету.
Сильно подавляется PGC-1α - регулятор биогенеза митохондрий.
- Уменьшает окислительный стресс.
- Частично восстанавливает экспрессию генов, контролируемых PGC-1α.
- Улучшает структуру митохондрий на уровне TEM.
MC работает в митохондриях и ядрах одновременно.
Однако, ядерный эффект особенно выражен только у HGPS-клеток, в то время как митохондриальные улучшения видны в обоих типах клеток.
Метиленовый синий способен облегчить как митохондриальные, так и ядерные нарушения, связанные с синдромом Хатчинсона–Гилфорда. Его двойное действие (антиоксидант и регулятор белков ядра) делает его уникальным кандидатом для лечения не только HGPS, но, возможно, и возрастных заболеваний.
Провести испытания на животных моделях.
Выяснить, как именно MC влияет на прогерин.
Определить, возможна ли адаптация препарата для клинического применения у людей.
Модель in vitro: все эксперименты на клетках, нет данных in vivo (на животных).
Пока неясен механизм растворения прогерина: MC «освобождает» его от ядерной оболочки, но как - не объяснено.
PGC-1α сам по себе не спасает: его экспрессия восстановлена, но эффекта не видно - значит, механизм сложнее, чем ожидалось.
Effects of methylene blue on postoperative low-back pain and functional outcomes after luMCar open discectomy (2015)
https://pismin.com/10.3171/2015.3.SPINE141172
После открытой поясничной дискеэктомии многие пациенты продолжают испытывать боль в пояснице (LBP), несмотря на успех операции. Это исследование проверяло, поможет ли местное применение метиленового синего (MC):
уменьшить послеоперационную боль (LBP и радикулит),
улучшить качество жизни пациентов (по шкале ODI),
Участники: 115 пациентов с LBP, направленные на открытую дискеэктомию.
MC-группа (n=52): 1 мл 0,5% метиленового синего, нанесённого на твердую мозговую оболочку и окружающие ткани после операции.
Плацебо-группа (n=55): аналогичный объем физиологического раствора.
Слепой метод: тройное слепое исследование - не знали ни врачи, ни пациенты, ни оценщики.
Оценки: уровень боли (по VAS) через 24 часа и 3 месяца, функциональное состояние по Oswestry Disability Index (ODI).
Через 24 часа: MC-группа - 1.25 балла против 2.80 у плацебо (p < 0.001).
Через 3 месяца: MC-группа - 1.02 балла против 2.07 (p = 0.019).
Общая разница в снижении боли: 8.11 против 6.07 баллов (p = 0.023).
Уменьшение ODI: −34.9 против −29.3 (p = 0.008)
Ни у одного пациента, получившего MC, не было зарегистрировано:
признаков серотонинового синдрома,
осложнений в месте введения (инфекции, воспаления).
Как работает метиленовый синий?
МС обладает несколькими биологическими эффектами:
- Блокирует NO-синтазу, снижая воспаление.
- Разрушает болевые (ноцицептивные) окончания - может способствовать длительному обезболиванию.
- Обладает нейропротективным действием.
- Подавляет моноаминоксидазу А (МАО-А) - влияет на уровень серотонина и других нейротрансмиттеров.
Однократное местное применение 1 мл 0,5% метиленового синего во время операции на поясничном отделе позвоночника:
значительно снижает боль в пояснице в течение 3 месяцев после дискеэктомии,
улучшает качество жизни пациентов,
Это исследование предлагает простой, доступный и безопасный способ улучшения послеоперационного восстановления пациентов. Однако требуется долгосрочное наблюдение и сравнение с другими средствами перед широким внедрением в клиническую практику.
Pain and functional improvement effects of methylene blue injection on the soft tissue around fusion site after traumatic thoracoluMCar fixation (2016)
https://pismin.com/10.1016/j.clineuro.2016.08.018
После травматических переломов грудо-поясничного отдела позвоночника пациенты часто страдают от сильной послеоперационной боли и нарушений подвижности. Это исследование было направлено на выяснение:
Уменьшает ли локальное применение метиленового синего (МС) боль после операции?
Улучшает ли оно качество жизни (QOL) пациентов в течение 6 месяцев?
Тип: рандомизированное, двойное слепое, плацебо-контролируемое исследование.
Участники: 50 взрослых пациентов (18–65 лет) с нестабильными переломами грудного и поясничного отделов позвоночника.
Группа 1 (n = 25): однократное нанесение 1 мл 0.5% раствора МС на мягкие ткани в зоне фиксации.
Группа 2 (n = 25): то же самое, но с физиологическим раствором (плацебо).
Боль (VAS) через 48 ч, 2 и 6 месяцев.
Функциональное состояние (ODI) через 2 и 6 месяцев.
→ Пациенты, получившие МС, испытывали значительно меньшую боль, особенно в первые 2 месяца.
→ У МС-группы больше пациентов с минимальной инвалидностью через 6 месяцев (76% против 44%).
Метиленовый синий оказывает многоуровневое действие:
Блокирует ноцицептивные окончания, снижая передачу болевого сигнала.
Подавляет синтез оксида азота (NO), участвующего в воспалении.
Имеет антиоксидантный и нейропротекторный потенциал.
Ингибирует моноаминоксидазу А (МАО-А), влияя на уровень серотонина и других медиаторов.
Локальное однократное нанесение 1 мл 0.5% раствора метиленового синего во время операции по фиксации позвоночника:
Уменьшает боль в течение 6 месяцев,
Улучшает качество жизни и снижает степень инвалидности.
Это простой, малозатратный и потенциально очень эффективный метод, который может быть полезен в рутинной клинической практике - особенно там, где послеоперационная боль остаётся проблемой.
P.S. Не вижу практического применения для обычных людей, не говоря о том, что с другими анальгетиками не сравнивали.
Functional MR Imaging of the Effects of Methylene Blue in the Human Brain (2016)
https://pismin.com/10.1148/radiol.2016152893
Многочисленные работы на животных показывают: метиленовый синий (MC) улучшает память и мозговой метаболизм.
Это исследование - первое, где учёные проверили нейрофизиологическое воздействие низкой дозы МС у здоровых людей.
Участники: 26 здоровых добровольцев (22–62 года).
Тип: двойное слепое, плацебо-контролируемое, рандомизированное.
Доза: однократная пероральная доза 280 мг (~4 мг/кг).
Psychomotor Vigilance Task (PVT) - устойчивое внимание.
Delayed Match-to-Sample (DMTS) - кратковременная память.
Проверка сосудистой реактивности (CVR) - с помощью 5% CO₂.
Повторное МРТ - через 1 час после приёма препарата.
Улучшение краткосрочной памяти: после приема метиленового синего наблюдалось на 7% больше правильных ответов в задаче на воспоминание (retrieval phase) по сравнению с до приема препарата. Это различие было статистически значимым (P = 0.01).
Взаимодействие «группа × время» для поведенческой точности в задаче памяти показало тренд, но не достигло значимости (F = 2.96, P = 0.09) - то есть разница между группами не была столь выраженной по сравнению с внутригрупповыми изменениями.
Нейровизуализационные (fMRI) результаты:
Психомоторное внимание (psychomotor vigilance task): наблюдалось значительное увеличение активности в билатеральной передней и задней островковой коре, с Z = 2.9–3.4 и P = 0.01–0.008, что говорит о статистически значимом усилении нейронной активации после метиленового синего.
Задача на кратковременную память (delayed match-to-sample): при выполнении фаз кодирования, удержания и воспроизведения информации выявлены значимые отличия в активации таких областей, как:
Гиппокамп и парагиппокампальная извилина
Церебеллярные области
Эти различия были значимы при P = 0.03–0.0003, в зависимости от области.
Входит в митохондрии, где действует как редокс-циклёр: принимает и отдаёт электроны, поддерживая активность цитохромоксидазы.
Это улучшает выработку энергии (АТФ) в активных участках мозга.
Результат: более сильная активация тех нейросетей, которые в данный момент обрабатывают задачи.
Даже у здоровых людей однократный приём МС усиливает работу систем внимания и рабочей памяти.
Изменения видны на fMRI, а не просто субъективны.
МС не вызывает изменений в мозговом кровотоке, но усиливает кислородное потребление и метаболизм нейронов.
Это первое исследование, которое с помощью fMRI показало, что однократная доза метиленового синего:
- усиливает функциональную активность мозга в зонах, ответственных за внимание и кратковременную память,
- улучшает производительность памяти,
- не влияет на сосудистую реактивность, подтверждая, что эффект связан именно с метаболизмом, а не кровотоком.
Исследование провели с адекватными статистическими мерами контроля, но из-за маленькой выборки полностью исключить влияние одного-двух участников нельзя. Авторы честно указывают это как ограничение исследования и говорят, что в будущем планируется работа с большей выборкой.
Methylene blue improves sensorimotor phenotype and decreases anxiety in parallel with activating brain mitochondria biogenesis in mid-age mice (2016)
https://pismin.com/10.1016/j.neures.2016.07.006
Известно, что старение мозга сопровождается ухудшением митохондриальной функции и повышением тревожности. Авторы поставили задачу:
- Проверить, может ли метиленовый синий (МС) улучшить поведение, мышечную силу, моторику и тревожность у средневозрастных мышей.
- Понять, активирует ли он биогенез митохондрий в мозге.
- Найти возможный механизм действия.
В исследовании использовались две возрастные группы:
- 7-месячные мыши – как условно "взрослые".
- 15-месячные мыши – как "средне-стареющие", ближе к возрастным изменениям (эквивалент примерно 50–60 лет у человека).
Таким образом, авторы хотели сравнить, есть ли возрастная чувствительность к действию метиленового синего.
(И действительно, эффект был сильнее именно у 15-месячных, что говорит о большей пользе MC в условиях уже начавшегося старения мозга.)
32 мыши (4 группы по 8 животных каждая).
Группы: контроль и МС (15 мг/кг/день, 60 дней, через питьевую воду).
Тесты: поведение (открытое поле, плюс-лабиринт), моторика (string test), митохондриальные измерения, экспрессия генов, H₂O₂, mtDNA и цитрат-синтаза.
MC улучшал моторику и мышечную силу в тесте на удержание на веревке (string test).
↑ Время в открытых рукавах (plus maze).
↑ Исследовательская активность (hole-poking, rearing).
Эффект особенно выражен у 15-месячных мышей.
↑ Образование H₂O₂ в митохондриях.
↑ Экспрессия генов митохондриального биогенеза:
↑ Количество mtDNA более чем в 2 раза.
↑ Активность цитрат-синтазы (показатель митохондриальной массы/качества).
MC действует как редокс-посредник → ускоряет работу дыхательной цепи.
Увеличивает образование H₂O₂ - но это сигнальный стресс, а не вред:
Активирует Nrf2/ARE сигнальный путь → стимулирует биогенез митохондрий.
Таким образом, MC омолаживает митохондриальный профиль мозга.
Метиленовый синий (15 мг/кг/день) в течение двух месяцев:
Улучшает моторику, мышечную силу и снижает тревожность у стареющих мышей.
Стимулирует митохондриальный биогенез в мозге - вероятно, через механизм "мягкого оксидативного сигнала".
Это исследование укрепляет репутацию МС как потенциального геропротектора - вещества, способного тормозить возрастные изменения.
Methylene blue treatment for residual symptoms of bipolar disorder: randomised crossover study
https://doi.org/10.1192/bjp.bp.115.173930
Исследователи проверяли, может ли метиленовый синий (МС) в дополнение к ламотриджину уменьшить:
- остаточные симптомы депрессии и тревоги,
- когнитивные нарушения у пациентов с биполярным расстройством I и II типа.
Участники: 37 пациентов (из 67 обследованных) с биполярным расстройством, стабилизированные на ламотриджине.
Дизайн: 6 месяцев, две фазы по 3 месяца, перекрёстное сравнение:
Псевдоплацебо (низкая доза): в качестве «псевдоплацебо» дали низкую дозу (15 мг/день) - достаточно, чтобы окрасить мочу, но предположительно - недостаточно для клинического эффекта.
Основные шкалы: MADRS, HRSD (депрессия), HRSA (тревога), YMRS (мания), нейропсихологические тесты.
Значимое снижение симптомов по обеим шкалам:
MADRS: p = 0.02, эффект ES = 0.80.
HRSD: p = 0.034, эффект ES = 0.71.
Эффект сохранялся при анализе intent-to-treat.
p = 0.028 (полный анализ), p = 0.015 (LOCF).
Эффект больше выражен в психической тревоге, чем в соматической.
Не изменялась во всех группах - это важно для безопасности!
Нет значимого улучшения ни по одному из тестов (CVLT, Trails B, Process Dissociation и др.).
Возможная причина: участники изначально имели относительно сохранное когнитивное функционирование.
Механизмы действия (гипотеза авторов)
Улучшает митохондриальную функцию (активация цитохромоксидазы).
Ингибирует NO-синтазу, влияя на нейровоспаление.
Может усиливать серотонинергическую и дофаминергическую передачу, особенно в гиппокампе.
Сочетание с ламотриджином, подавляющим глутамат, может давать синергический нейропротективный эффект.
Метиленовый синий в дозе 195 мг/день может быть безопасным и эффективным дополнением к терапии ламотриджином у пациентов с биполярным расстройством, улучшая остаточные симптомы депрессии и тревоги, но не улучшая когнитивные функции.
Авторы исследования не зарегистрировали статистически значимого улучшения симптомов депрессии или тревожности на 15 мг.
Все значимые эффекты (по шкалам MADRS, HRSD, HRSA) наблюдались только при 195 мг/день.
Более того, в пределах перекрёстного дизайна пациенты показывали улучшение именно в фазу высокой дозы.
15 мг/день → эффект сопоставим с плацебо.
195 мг/день → значимое улучшение депрессии и тревоги.
Авторы прямо указывают, что низкая доза использовалась для маскировки, а не как потенциально активная терапевтическая.
Anti-Aging Potentials of Methylene Blue for Human Skin Longevity
https://doi.org/10.1038/s41598-017-02419-3
Проверить, способен ли метиленовый синий (MC) замедлять старение кожи человека через:
- нейтрализацию свободных радикалов (ROS),
- стимуляцию митохондрий,
- активацию гена Nrf2 и антиоксидантных ферментов,
- улучшение структуры и функции кожи (гидратация, эластичность, заживление).
2D культура: кожные фибробласты от молодых, пожилых и прогероидных доноров.
3D модель: реконструированная кожа человека (EpiDerm Full Thickness).
Дозы MC: от 0.1 до 500 μМ; наилучшие эффекты - при 0.5–2.5 μМ.
Сравнение с антиоксидантами: NAC, MitoQ, mTEM.
Метиленовый синий - мощный и безопасный антиоксидант, который:
замедляет старение кожи, усиливает регенерацию,
повышает эластичность и увлажнённость,
улучшает экспрессию структурных белков и снижает разрушение дермы.
При использовании в низких концентрациях (0.5–2.5 μМ) он показывает потенциал как активный ингредиент антивозрастной косметики будущего.
Methylene blue modulates functional connectivity in the human brain
https://doi.org/10.1007/s11682-016-9541-6
Авторы хотели проверить, может ли однократный приём низкой дозы метиленового синего (MC) повлиять на функциональную связанность (functional connectivity) мозга у здоровых взрослых, используя:
fMRI в состоянии покоя (resting state),
fMRI во время выполнения задачи (визуомоторный тест).
Тип: рандомизированное, двойное слепое, плацебо-контролируемое.
Участники: 28 здоровых добровольцев, из них:
13 - в группе MC, 280 мг (≈ 4 мг/кг),
13 - в группе плацебо (FD&C Blue #2 - краситель).
Исследование fMRI до и через 1 час после приёма MC/плацебо.
Выполнение визуомоторной задачи (пальцевая таппинг-реакция) и отдых с закрытыми глазами.
Также проведён тест на реакцию сосудов на CO₂ (цереброваскулярная реактивность).
1. Визуомоторная задача (VMT):
После приёма MC наблюдалась сниженная активность в:
Это не обязательно значит «меньше работы» мозга - возможно, MC усилил эффективность: участки, обычно работающие "в фоновом режиме", были более подавлены при активации задачи, что отражает оптимизацию нейронной сети. Но это не точно.
2. Связанность в состоянии покоя (resting-state fMRI):
После MC увеличилась функциональная связанность между ключевыми зонами:
3. Цереброваскулярная реактивность:
Не выявлено изменений в реакции сосудов на гиперкапнию (CO₂).
Это подтверждает: эффекты MC вызваны не сосудистыми сдвигами, а усилением клеточного метаболизма и кислородного потребления.
Метиленовый синий в низкой дозе (280 мг) у здоровых людей:
- Усиливает функциональную связанность в зонах, отвечающих за зрение, моторику и память.
- Оптимизирует работу нейросетей при выполнении задач.
- Не влияет на сосудистую реактивность - его эффект чисто метаболический.
- Отсутствие поведенческих данных (не оценивалась память, внимание и т.д.).
- Не измеряли уровень MC в крови.
- Эффект от одного приёма, не ясно, как MC действует при регулярном применении.
- Безопасность: единственный побочный эффект - синяя моча.
МЕТИЛЕНОВЫЙ СИНИЙ В КЛИНИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЯХ (по Galvan et al., 2021)
https://doi.org/10.1590/1678-4324-20212002660266
Авторы проанализировали публикации с 1950 по 2020 год.
Было найдено 7231 статья, после фильтрации оставили 66, соответствующих критериям (это клинические испытания, кейс-серии и обзоры).
Итоговый анализ включил данные по:
Хотя МС считается безопасным, авторы описывают возможные побочные эффекты:
Авторы подчёркивают важность персонализированного подбора дозировки и предупреждения об опасных сочетаниях, особенно при использовании с антидепрессантами.
Methylene Blue: a Controversial Diagnostic Acid and Medication?
https://doi.org/10.1093/toxres/tfac050
Цель статьи
Это нарративный обзор, в котором авторы пытаются разобраться, насколько обосновано, безопасно и эффективно клиническое использование метиленового синего (МС), особенно в условиях отсутствия унифицированных протоколов, а также на фоне накопленных данных о его потенциальной токсичности и побочных эффектах.
Основные механизмы действия MC
Ингибирует синтез NO и активность гуанилатциклазы
→ снижает вазодилатацию, улучшает артериальное давление
Антиоксидантные свойства, в том числе scavenging супероксида
Кофактор восстановления Fe³⁺→ Fe²⁺ при метгемоглобинемии
Ингибитор MAO-A - действует как психоактивное средство
Особенно выражены побочные эффекты при сочетании с антидепрессантами, что может привести к летальному серотониновому синдрому.
Часто используется в интенсивной терапии, но большинство данных - нерандомизированные и противоречивые
FDA предупреждает о рискe неврологических осложнений, но препарат продолжает широко применяться
Визуализация паращитовидных желёз с MC показала корреляцию с послеоперационной спутанностью сознания
Исторически применялся даже интратекально - были случаи параплегии и кауда-синдрома
Сравнительная таблица: Показания – Дозы – Побочные эффекты метиленового синего
Метиленовый синий - это эффективное, но потенциально опасное средство, особенно при несоблюдении дозировок и игнорировании взаимодействий с другими препаратами.
- персонализированной оценки риска (включая генетику: G6PD-дефицит),
- осторожности с антидепрессантами.
The effects of acute methylene blue administration on cerebral blood flow and metabolism in humans and rats
https://doi.org/10.1177/0271678X231157958
Оценить, как однократное введение метиленового синего (MC) влияет на:
- потребление кислорода (CMRO₂),
- потребление глюкозы (CMRglu)
у здоровых людей и крыс с помощью нейровизуализации и авторадиографии.
- MC 2 мг/кг и 4 мг/кг внутривенно
- измеряли CBF (MRI) и CMRglu (авторадиография)
- исследовали как в бодрствующем, так и в анестезированном состоянии
Все показатели снизились - вопреки гипотезе, что MC должен улучшать метаболизм.
Почему так? - Объяснение авторов
Гипотеза: “горметический эффект”
MC действует по принципу "мало - полезно, много - тормозит".
Низкие дозы (например, <0.5 мг/кг) могут стимулировать митохондрии.
Более высокие дозы (1 мг/кг у человека ≈ 6 мг/кг у крыс) тормозят ЦО-оксидазу и подавляют метаболизм.
ингибирует синтез NO, снижая вазодилатацию и CBF;
накапливается в мозге в 10–20 раз больше, чем в плазме;
вызывает многоцелевое воздействие (NO-сигналы, MAO-A, гуанилатциклаза и др.).
Участники с 0.5 мг/кг ощущали больше энергии, чем при 1 мг/кг и плацебо.
Боль при введении MC коррелировала с дозой.
Влияние метиленового синего на сперматозоиды:
Просто сразу напишу, источники к этой части в самом конце.
Общая картина
Метиленовый синий (MC) - это мощный редокс-активный краситель, действующий как электронный донор и акцептор. Его эффекты на сперматозоиды зависят от дозировки, времени воздействия и контекста использования:
в наномолярных дозах может стимулировать митохондриальную активность,
в микро- и миллимолярных - действует спермицидно, разрушая функции и структуру сперматозоидов.
Случаи положительного эффекта (в низких дозах)
"Влияние метиленового синего на подвижность сперматозоидов у мужчин с астеноспермией"
Модель: сперма 40 мужчин с нарушенной подвижностью
Эффект: через 1 час активная подвижность увеличилась у 70% пациентов
Через 2 часа: эффект постепенно снижался
Интерпретация: стимуляция митохондрий → ↑ АТФ → ↑ подвижность
Важно: действие кратковременно и обратимо
"Spermatozoal methylene blue reduction as indicator of mitochondrial function"
MC не вводился, но использовался в тесте на восстановление (редокс-активность сперматозоидов)
Вывод: активность восстановления MC коррелирует с подвижностью → MC отражает митохондриальную функцию
Косвенное доказательство, что энергетически активные сперматозоиды быстрее восстанавливают MC
Случаи угнетающего эффекта (в средних и высоких дозах)
Wood et al., 2003 (Contraception, США)
"Effect of diltiazem and methylene blue on human sperm motility"
Модель: сперма здоровых доноров
Через 15 минут - 0% подвижных сперматозоидов
В слизь шейки матки не проникали
Вывод: MC полностью блокирует движение, не убивая сперматозоиды
Использовалось как потенциальное средство стерилизации при вазэктомии
Sheynkin et al., 1999 (Fertility & Sterility, США)
"Effect of methylene blue on human sperm motility in vitro"
Дозы: 1% MC и его разведения (1:2 и 1:4)
Подвижность снижалась до 1.1% (1%) и 11% (1:4)
Эффект - почти полный в течение 15 минут
Подтверждает: даже разбавленный MC резко снижает подвижность
Coddington et al., 1989 (Fertility and Sterility, США)
"Adverse effects of methylene blue on human sperm and eMCryo cleavage"
Минимальная доза с эффектом: 0.0005% = ~15 мкМ
Через 45 минут - подвижность <15%
После промывания MC не восстанавливалась
0% развитие эМСрионов мыши даже при дозе 15 мкМ
Указывает на противозачаточный и токсичный потенциал
Green et al., 2001 (Contraception, США)
"Comparative spermicidal activity of MC and other oxidants"
I₅₀ MC: 2.3 мМ (концентрация, при которой теряется 50% подвижности за 20 секунд)
Toluylene blue: 26 μM (сильнее)
Iodine (I₂): полный эффект за 20 сек
MC менее эффективен, чем йод, но всё равно оказывает прямое спермицидное действие
Все описанные исследования влияния метиленового синего (MC) на сперматозоиды проводились in vitro - в пробирке.
Это значит, что:
- сперма исследовалась вне тела, в контролируемых лабораторных условиях;
- концентрации MC вводились напрямую в сперматозоидную суспензию;
- не учитывались процессы метаболизма, распределения и выведения MC, которые происходят в живом организме.
Как MC поведёт себя в организме живого человека - до конца не ясно.
Вот почему:
- После перорального приёма MC:
- он проходит через печень (эффект первого прохождения),
- преобразуется частично в леукометиленовый синий (восстановленная форма),
- накапливается в тканях (в том числе в мозге и митохондриях),
- выводится через почки и кишечник.
- Концентрация MC в семенной жидкости после приёма внутрь неизвестна, и в большинстве исследований не измерялась.
- Даже если MC циркулирует в плазме, он может не проникать в значимом количестве в эпидидимис и семенные пузырьки, где хранятся и дозревают сперматозоиды.
Итоговое мнение и что будет дальше:
Метиленовый синий - препарат довольно противоречивый. С одной стороны, у него есть интересные механизмы действия, подтверждённые in vitro и на животных. С другой - клинические данные неоднородны, а у здоровых людей эффект может быть не только слабым, но и обратным ожидаемому.
⠀
Применять его или нет - это решение, которое каждый должен принимать самостоятельно, учитывая цели, состояние здоровья и потенциальные риски.
⠀
Ниже я собрал возможные взаимодействия, которые стоит учитывать спортсменам и биохакерам, а также практические схемы применения, основанные на доступных научных данных и предположениях.
Возможные лекарственные и биохимические взаимодействия MC
1. Селективные ингибиторы обратного захвата серотонина (SSRI), SNRI, трициклические и MAO-инги
Примеры: флуоксетин, сертралин, венлафаксин, моклобемид, амитриптилин. MC: ингибирует MAO-A (даже в низкой дозе)
- Серотониновый синдром - потенциально опасное, иногда смертельное состояние
- Симптомы: лихорадка, спутанность сознания, мышечные спазмы, тремор, тахикардия
- Зарегистрированы случаи, включая приём MC в медицинских условиях после анестезии
!!! Категорически не сочетать.
2. Препараты, влияющие на систему оксида азота (NO)
Примеры: аргинин, цитруллин, агматин, нитраты, свекла, AAKG. MC:подавляет NO-синтазу, ингибирует гуанилатциклазу → ↓ цГМФ
b) PDE5-ингибиторы (силденафил, тадалафил)
MC: снижает базовую активацию цГМФ → ослабляет эффекты "виагры"
- Неэффективность препарата, или даже в редких случаях - гипертензивная реакция или судороги
Разнести по времени или не сочетать вообще.
3. Гормон роста (GH) и IGF-1 стимуляция
GH: активирует путь PI3K → AKT → mTOR
MC: активирует AMPK, ингибирует mTOR
MC может снижать эффективность GH и подавлять его эффект
Разнести по времени (GH - утром, MC - вечером или наоборот)
4. Анаболические стероиды (AAS)
AAS: активируют mTOR, IGF-1, NO, усиливают оксидативную нагрузку
MC: подавляет NO, активирует AMPK, защищает митохондрии
↔ Взаимодействие двойственное:
- Может защищать от нейрооксидативных эффектов AAS
- Может подавлять анаболические сигналы в фазе роста
Лучше, если использовать, то в фазе восстановления (пкт, мост)
5. Митохондриальные кофакторы и антиоксиданты
Совместимы и возможно усиливают эффект:
- ALA (альфа-липоевая кислота)
Как вариант для митохондриальной поддержки и восстановления
MC: усиливает дофаминовую и норадреналиновую стимуляцию (через MAO-A)
(Кофеин / йохиМСин / эфедрин/ ЦНС-стимуляторы)
- Перегрузка стимуляции: тремор, тахикардия, тревожность
- Индивидуальная чувствительность
Будь осторожен с дозировками или разделяй по времени (4–6 часов).
Метиленовый синий: сколько работает - а сколько уже мешает?
Метиленовый синий (MC) - одна из самых обсуждаемых молекул в биохакинге, нейропротекции и спортивной физиологии. Его свойства как стимулятора митохондрий, антиоксиданта и регулятора энергообмена делают его потенциально мощным инструментом. Но вот главный вопрос: в каких дозах он действительно работает, а где уже вреден?
Что выглядит безопасным?
Теоретически, низкие дозировки MC - в пределах 10–20 мг в сутки у взрослого человека - считаются наиболее безопасными и логически обоснованными для мягкой стимуляции митохондрий.
- MC может активировать комплекс IV дыхательной цепи (цитохромоксидазу)
- снижать образование свободных радикалов
- активировать AMPK → аутофагию
Но есть важное уточнение:
На данный момент клинически эффективность таких доз не подтверждена.
В единственном исследовании с дозировкой 15 мг/сутки - эта группа была плацебо, для окрашивания мочи, и не имела статистически значимых улучшений.
Исходя из клинических данных, можно сделать обоснованное предположение:
Дозировки в районе 0.5 мг/кг
- вероятно, действительно дают метаболический эффект,
но…
уже при этой дозе могут проявляться обратные эффекты:
• угнетение мозгового кровотока (CBF)
• снижение потребления кислорода (CMRO₂)
• головные боли, “торможение”, сонливость
MC не просто "улучшает митохондрии" - он:
подавляет NO-синтазу, снижает сосудистый тонус
ингибирует гуанилатциклазу → снижение цГМФ → хуже perfusion
ингибирует MAO-A, повышая уровень нейромедиаторов (что может быть как плюсом, так и минусом)
Дозы до 20 мг/сутки - вероятно безопасны, но эффект у них сомнителен.
Дозы ~0.5 мг/кг (~30–50 мг) - вероятно, работают, но…
У здоровых людей эффект может быть непредсказуемым, “перетормозить”, особенно при хроническом приёме.
Протокол для выносливости (на основе физиологии)
Пик действия MB по данным Singh (2023) — через 30–60 минут → приём слишком близко к началу вызывает снижение CBF и моторику.
Через 2–3 часа метаболический эффект остаётся, а сосудистое торможение частично проходит. Надеемся на устойчивость к снижению сердечного выброса, улучшение устойчивости к нагрузке, снижение утомления, защиту митохондрий в гипоксии. А что по дозировкам? Да хрен его знает. Начните с 2 мг, и проверьте как на вас сработают (или не сработают) 5, 10, 15, 20мг.
Если ты покупаешь готовый 1% раствор метиленового синего в виде капель, учти, что в одной капле содержится примерно 0.4 мг действующего вещества. Это значит, что 2–5 капель будут соответствовать примерно 1–2 мг - типичной микродозе. При этом точное количество может немного варьироваться в зависимости от пипетки или капельницы. Для более точного контроля дозы лучше использовать инсулиновый шприц (1 мг = 0.1 мл (100 мкл)). И важно помнить: метиленовый синий легко окрашивает слизистую рта и язык в ярко-синий цвет, особенно при приёме неразведённого раствора - это нормально и временно.
С вами лучший канал о допинге НаДопинге также не забываем, что есть самый полезный Чат.
Для профессианального ведения обращаться сюда
Источники к части про сперматозоидов
Coddington, C.C. et al. (March, 1989) Adverse effects of methylene blue on human sperm motility, components of human reproductive tract fluids, and mouse eMCryo cleavage. Fertility & Sterility, 51(3):480-5. doi: 10.1016/s0015-0282(16)60558-7
https://pismin.com/10.1016/s0015-0282(16)60558-7
Summary; In normospermia semen samples of healthy men, the addition of 0.01% to 0.001% Methylene Blue solution (0.1mg/1mL to 0.01mg/1mL) reduced motility from 93.7% to 0% within 45 minutes of experiment, the addition of 0.0005% Methylene Blue solution (0.005mg/1mL) reduced motility from 93.7% to 1.7% within 60 minutes of the experiment, perhaps by interfering with normal receptor action or meMCrane transport functions of sperm.
Donnelly, E.T. et al. (SepteMCer, 1997) Sperm nitric oxide and motility: the effects of nitric oxide synthase stimulation and inhibition. Molecular Human Reproduction, 3(9):755-62. doi: 10.1093/molehr/3.9.755
https://pismin.com/10.1093/molehr/3.9.755
Summary; In normospermia semen samples of healthy men, the addition of 10 mcM, 25mcM, 50mcM & 100 mcM Methylene Blue significantly reduces Nitric Oxide (NO) production in spermatozoa & progressive motility in a concentration-dependent fashion within 10 minutes of the experiment
Sheynkin, Y.R. et al. (January, 1999) Effect of methylene blue, indigo carmine, and Renografin on human sperm motility. Urology, 53(1):214-7. doi: 10.1016/s0090-4295(98)00414-2
https://pismin.com/10.1016/s0090-4295(98)00414-2
Summary; In normospermia semen samples of healthy men, the addition of 1% Methylene Blue solution (10mg/1mL) reduced motility from 70.3% to 1.1%, the addition of 0.5% Methylene Blue solution (5mg/1mL) reduced motility from 70.3% to 4.9% & the addition of 0.25% Methylene Blue solution (2.5mg/1mL) reduced motility from 70.3% to 11.2%
Green, T.R. et al. (July, 2001) Human spermicidal activity of inorganic and organic oxidants. Fertility & Sterility, 76(1):157-62. doi: 10.1016/s0015-0282(01)01830-1
https://pismin.com/10.1016/s0015-0282(01)01830-1
Summary; Methylene Blue exhibited some spermicidal activity, resulting in a 50% loss in sperm motility
Wood, B.L. et al. (March, 2003) Effect of diltiazem and methylene blue on human sperm motility, viability and cervical mucus penetration: potential use as vas irrigants at the time of vasectomy. Contraception, 67(3):241-5. doi: 10.1016/s0010-7824(02)00515-2
https://pismin.com/10.1016/s0010-7824(02)00515-2
Summary; In normospermia semen samples of healthy men, the addition of 0.5% to 0.03% Methylene Blue solution (5mg/1mL to 0.31mg/1mL) reduced motility from 60.3% / 71.9% to 0.0% within 2 hours of the experiment, probably because Methylene Blue transfers electrons and can cause oxidative stress to spermatozoa, potentiating sperm-immobilizing activity
Evdokimov, V.V. (2019) Influence of methylene blue on human spermatosoid mobility in vitro. Eksperimental'naya i klinicheskaya urologiya (Experimental & Clinical Urology) 2019(3):50-53. doi 10.29188/2222-8543-2019-11-3-50-53