Сыворотки и вакцины

Диагностические сыворотки: подразделение, состав, принципы получения. Агглютинирующие сыворотки. Отличия адсорбированных и неадсорбированных агглютинирующих сывороток. Практическое применение. Примеры.

Диагностические сыворотки - содержат известные антитела

Применение: в серологических реакциях для идентификации возбудителя или его токсина, и для выявления неизвестных антигенов в исследуемом материале - кровь, моча, мокрота или пищевые продукты, почва

Получение: многократная иммунизация животных (кроликов, баранов) различными антигенами - микробами или их очищенными антигенами, токсинами, белками

Диагностические сыворотки подразделяются в зависимости от серологических реакций, в которых они участвуют, на агглютинирующие (неадсорбированные и адсорбированные), преципитирующие, гемолитические и антитоксические.

Агглютинирующие сыворотки бывают:

- адсорбированные - освобожденные от групповых АТ

- неадсорбированные - видовые

Неадсорбированные сыворотки:

• обладают высоким титром (1:25000 и выше), но недостаточно специфичны
• содержат несколько типов АТ для тех АГ, которыми иммунизировали животное
• кроме специфических АТ, в них могут быть и групповые АТ (за счет которых происходит агглютинация не только с бактериями, которыми проводилась иммунизация, но и с родственными бактериями, имеющими общие групповые антигены

Адсорбированные сыворотки:

• строгая специфичность
• титры их обычно низкие (1:40 – 1:320)

Получение адорбированной сыворотки:

1) в сыворотку добавляют кучу родственных бактерий

2) тремостат

3) центрифугируют

4) образовавшиеся АГ-АТ уходят в осадок

5) в надосадочной жидкости остаются специфические АТ

иногда по очереди инкубируют с разными родственными бактериями, тогда остаются АТ только к рецепторам одной специфичности

Диагностические сыворотки, их подразделение, получение и практическое применение. Моноклональные антитела. Гибридомы, их использование для получения моноклональных антител.

Моноклональные антитела – это высокоспецифичные АТ, продуцируемые одним клоном антителообразующих клеток. Они однородны по своему составу и способны связываться только с одной детерминантой (эпитопом) антигена.

Получение:

1) из селезенки иммунизированных определенным АГ мышей выделяют В-лимфоциты (короткоживущие)

2) их соединяют с миеломными клетками, которые были выделены из мышиной опухоли (миеломы)

3) клетки опухоли могут непрерывно размножаться, но не вырабатывают АТ

4) проводят слияние В-клеток и миеломных клеток и получают гибридные клетки – гибридомы, которые способны к образованию АТ и к непрерываному делению

5) Клетки-гибридомы культивируют в специальной среде, где не могут размножаться исходные клетки

6) Производят клонирование путем размножения из одной исходной гибридомной антителообразующей клетки

К вирусному, микробному или другим антигенам получают несколько моноклональных антител (спектр или панель моноклональных антител), к разным эпитопам исследуемого антигена.

Анатоксины: свойства, принцип получения, единицы измерения. Ассоциированные вакцины, их свойства, примеры. Охарактеризуйте иммунитет, формируемый в результате введения ассоциированных вакцин.

Анатоксины получают из бактериальных экзотоксинов путем 3-5- недельного воздействия 0,3-0,4% формалина при температуре 37-40С - теряют свою ядо- витость, сохраняя антигенные и иммуногенные свойства

Полученные анатоксины подвергают очистке от балластных веществ (питательной среды, продуктов метаболизма), концентрируют и адсорбируют на гидроксиде алюминия

Свойства - конкретно нету, напишу от себя:

• не ядовиты
• антигенны и иммуногенны
• низкая реактогенность, поэтому мало противопоказаний к применению

Выпускают в жидком виде, для иммунитета против болезней

Примеры анатоксинов:

Анатоксин дифтерийный очищенный адсорбированный (АД- анатоксин). Препарат содержит очищенный дифтерийный анатоксин, сорбированный на алюминия гидроксиде.

Анатоксин столбнячный очищенный адсорбированный (АС- анатоксин). Препарат содержит очищенный столбнячный анатоксин, сорбированный на алюминия гидроксиде.

АНТИГЕННАЯ ЕДИНИЦА (АЕ) - единица измерения антигенных и антитоксических свойств токсинов и анатоксинов.

Соответствует кол-ву антитоксических единиц, полностью связывающих 1 мл токсина или анатоксина.

Ассоциированные (комплексные) вакцины.

Представляют собой сочетание различных типов вакцин и предназначены для одновременной иммунизации против разных инфекций.

Могут состоять из:

- однородных препаратов (например, нескольких анатоксинов)

- различных типов вакцин - точные дозировки, не создающие конкуренции, чтобы иммунитет ко всем АГ был одинаковой интенсивности

Наиболее эффективны однородные

Применение комплексных вакцин приводит к снижению инъекционной нагрузки (уменьшению числа инъекций, связанных с ними стрессов и дополнительных рисков возникновения осложнений), а также понижению экономических затрат.

Вакцина коклюшно-дифтерийно-столбнячная адсорбированная жидкая ― АКДС-вакцина.

Препарат состоит из взвеси убитых коклюшных палочек (Bordetella pertussis) и очищенных дифтерийного и столбнячного анатоксинов, сорбированных на алюминия гидроксиде. Вакцина предназначена для плановой профилактики коклюша, дифтерии и столбняка детям в возрасте от 3-х месяцев.

Тривакцина против кори, эпидемического паротита и краснухи – MMR, живая сухая (США).

Препарат содержит смесь живых аттенуированных штаммов вирусов кори, паротита и краснухи. Применяется для активной иммунизации детей.

Возникает специфический устойчивый искусственный активный иммунитет

Лечебно-профилактические сыворотки и иммуноглобулины. Антитоксические сыворотки: получение, титрование. Примеры антитоксических сывороток. Охарактеризуйте иммунитет, формируемый в результате введения таких препаратов.

Антитоксические сыворотки – единственное специфическое средство, способное нейтрализовать токсическое действие экзотоксинов в организме больного. Особенно эффективно раннее введение сыворотки, так как антитела- антитоксины способны нейтрализовать токсин только до его адсорбции на клетке-«мишени».

Получение: из крови лошадей, гипериммунизированных соответствующим анатоксином, подвергают концентрации и очистке от балластных веществ методом «Диаферм», который включает высаливание альбуминов сернокислым аммонием, ферментативное расщепление неиммунных глобулинов и диализ.

Титрование: полученную сыворотку титруют (обычно используют реакцию флоккуляции) для определения её антитоксической активности, измеряемой в международных единицах - МЕ.

Примеры: противодифтерийная, противостолбнячная, противоботулинические (поливалентная и моно- валентные препараты типов А, В, E и др.), противогангренозные(как поливалентная, так и моновалентные препараты против Clostridium perfringens типа A, Clostridium novii, Clostridium septicum) и другие.

Иммунитет: Чужеродные иммуноглобулины циркулируют в крови короткое время (10-15 дней), так как организм вырабатывает против них анти- тела, вызывающие их разрушение. Защитное действие гетерологичных иммуноглобулинов (пассивный иммунитет) продолжается лишь в течение 1-2-х недель.

Лечебно-профилактические сыворотки и иммуноглобулины. Антивирусные сыворотки. Получение. Сущность их защитного действия. Примеры, практическое применение.

Антивирусные сыворотки оказывают хороший эффект только при раннем введении – в первые 3-4 дня.

Сущность защитного действия: нейтрализуют внеклеточные вирусы, препятствуют их прикреплению к клеткам, и нейтрализуют вирусы, выходящие из клеток. Более позднее введение неэффективно, так как вирус реплицируется внутри пораженных клеток, в которые антитела проникнуть не могут.

Получение: проводят на определенном виде животных (кролики, морские свинки, крысы и др.), что связано с особенностями того или иного вируса.

Животные, чаще кролики, иммунизируются живым или инактивированным вирусом:
После нескольких иммунизаций у животных берут кровь и определяют количество антител в сыворотке. Сила диагностической противовирусной сыворотки определяется ее титром, т.е. наибольшим разведением, дающим соответствующую реакцию иммунитета.

Лечебно-профилактические сыворотки и иммуноглобулины. Их классификация по спектру действия. Гомологичные и гетерологичные препараты, принципы их получения. Применение

Геторологичные (ксеногенные) сывороточные препараты

Сыворотки получают путем гипериммунизации лошадей (редко волов и коз) соответствующими антигенами - анатоксинами, бактериями или вирусами. От этих животных можно получить много крови и, соответственно, сыворотки, биохимимический состав этих сывороток относительно близок к сыворотке человека, что снижает силу аллергических реакций. Гетерологичные сыворотки проще получать в большом количестве и они дешевле, чем гомологичные.

Из цельных (нативных) сывороток готовят очищенные и концентрированные препараты. Для этой цели удаляют балластные белки и концентрируют фракции иммуноглобулинов, это повышает безопасность сывороток.

Гомологичные (аллогенные) сывороточные препараты

Гомологичные препараты представлены иммуноглобулинами, иногда плазмой, их получают от здоровых людей, специально имму- низированных доноров или реконвалесцентов, перенесших соответ- ствующее инфекционное заболевание.Иммуноглобулины человека (ИГЧ) получают из сыворотки или плазмы крови, удаляя балластные глобулиновые фракции и концен- трируя этиловым спиртом при температуре ниже 00С. Препараты пред- ставляют собой 10% раствор белка, в котором не менее 95% приходится на гамма-фракцию, содержащую преимущественно антитела иммуно- глобулины. Изготавливают 2 типа иммуноглобулинов: нормальный и имму- ноглобулины направленного действия.

Иммуноглобулин человека нормальный. Для его изготовления используют сыворотку или плазму, полученную не менее чем от 1000 здоровых людей. Препарат содержит широкий спектр антител различ- ной специфичности

Иммуноглобулины человека направленного действия имеют повышенный титр соответствующих антител.

Вакцины. Основные требования, предъявляемые к вакцинам. Живые вакцины: принципы получения, примеры. Характеристика поствакцинального иммунитета.

Вакцины – иммунобиологические препараты из живых аттенуированных или инактивированных микроорганизмов, токсинов, микробных АГ используемые для создания специфического активного искусственного иммунитета.

Основные требования к вакцинным препаратам:

- высокая иммуногенность и создание достаточно стойкого иммунитета

- остаточная вирулентность для аттенуированных штаммов и стабильность их свойств

- безвредность

- ареактивность (отсутствие выраженных побочных реакций)

- гипоаллергенность

- отсутствие в препарате контаминирующих микроорганизмов

- доступность стоимости производства

Живые вакцины готовят из вакцинных штаммов бактерий, риккетсий, вирусов, полученных различными методами селекции.

Вакцинные штаммы являются аттенуированными (ослабленными), сохранившими незначительную остаточную вирулентность и не способны вызвать клинически выраженную инфекцию.

Получение: путем снижения вирулентности микроорганизма при культивировании в неблагоприятных условиях или путем пассажей на маловосприимчивых животных, в куриных эмбрионах и клеточных культурах, выделением аттенуированных мутантов от больных или из внешней среды, воздействием мутагенов.

Примеры: БЦЖ, Вакцина сибиреязвенная СТИЮ интраназальная гриппозная

Полиомиелитная пероральная живая вакцина Себина (Sebin) 1,2,3 типов, жидкая. Содержит аттенуированные штаммы вирусов полиомиелита типов 1,2,3 Себина, выращенных на культуре клеток почек зеленых мартышек.

Моделирует инфекционный процесс с развитием длительного гуморального (антитела класса IgG) и местного иммунитета (антитела класса IgA).

Иммунитет: поствакцинальный (клеточный и/или гуморальный) по своей напряженности приближающийся к постинфекционному

Вакцины: их подразделение, основные требования, предъявляемые к вакцинам. Принципы получения инактивированных вакцин. Приведите примеры вакцин, применяемых для плановой вакцинации детей. Охарактеризуйте поствакцинальный иммунитет.

Все можно разделить по составу на:

1) корпускулярные (живые и инактивированные)

2) растворимые (химические и анатоксины)

3) генно-инженерные;

По назначению на: профилактические и лечебные

Различают несколько поколений вакцин:

• вакцины первого поколения – корпускулярные вакцины, состощие из целых микроорганизмов живых или убитых;
• вакцины второго поколения - препараты, состоящие из отдельных фракций возбудителей или продуктов их жизнедеятельности –химические вакцины и анатоксины;
• вакцины третьего поколения – рекомбинантные вакцины, полчаемые генно-инженерными методами.

Инактивированные (убитые) корпускулярные вакцины содержат микробные клетки или вирионы (корпускулярные бактериальные и цельновирионные вакцины).

Для их приготовления используют, вирулентные микроорганизмы, содержащие протективные антигены, активность которых должна сохраниться после инактивирующего воздействия факторов физической или химической природы или комбинацией обоих факторов.

Примеры - для профилактики:

Инактивированная гриппозная вакцина (ИГВ). Препарат представляет собой взвесь вирусов гриппа H1N1, H3N2 и В, выращенных на 10-11-дневных куриных эмбрионах, инактивированных формалином и УФ, концентрированную и очищенную ультрацентрифугированием.или хроматографией.

Препарат вводится парэнтерально (подкожно) или интраназально для профилактики гриппа в осеннее-зимний период.

Иммунитет: как правило гуморальный, менее напряженный с меньшей длительностью, чем живые вакцины, не индуцируют местный иммунитет, требуется их 2-3х-кратное введение, частое проведение повторных курсов иммунизации, что позволяет создать достаточно прочный иммунитет, предохраняя привитых от болезни или уменьшая тяжесть

ТОКСИЧНЫ И АЛЛЕРГЕННЫ, НО НИКОГДА НЕ ВЫЗЫВАЮТ ВАКЦИННОЙ БОЛЕЗНИ

Вакцинация. Эффективность вакцинации. Национальный календарь прививок РФ: цель проведения вакцинации детей и подростков, характеристика вакцин.

Эффективность вакцинации зависит от:

• биологических свойств возбудителей и изготовленных из них препаратов
• способов введения вакцин
• иммунореактивности макроорганизма.
• достаточность контакта м/о и АГ - поэтому нужны повторные ревакцинации
• тип и качество вакцины
• способность возбудителя вызывать стойкий иммунный ответ

Вакцинных препараты могут вводиться в организм человека

• парэнтерально (внутримышечно, подкожно, в скарифицированную кожу)
• перорально
• интраназально
• в свечах и клизмах

Согласно национальному календарю прививок РФ всем детям в обязательном порядке проводится вакцинация против 10 заболеваний:

1. туберкулез
2. вирусный гепатит В - моно - Энжерикс В, Регевак В - 0-1-6 или 0-1-2-12, или поли - АКДС-геп В или АКДС-геп В- Hib
3. дифтерия АКДС - комплексная, убитые клетки коклюша и два анатоксина 3, 4,5, 6 мес
4. коклюш АКДС
5. столбняк АКДС
6. полиомиелит - ИПВ - 3, 4,5 мес, ОПВ - 6 мес, реавакцинация - 18,20 мес, 14 лет
7. корь
8. краснуха
9. эпидемический паратит - все вместе - живая вакцина 12 мес и 7 лет - MMR
10. грипп - 2 поколения с 6 мес и каждый год осенью

Еще ротив 13 только по эпидемическим показаниям- туляремия, чума, бруцеллез, сибирская язва, бешенство, лептоспироз, клещевой энцефалит, лихорадка Ку, желтая лихорадка, брюшной тиф, менингококковая инфекция, вирусный гепатит А, холера.