ASP Lab
Новый год я решил начать с небольшого анализа, а именно, прикинуть какая магазинная бурда чаще всего посещает мой холодильник. Фаворитов образовалось аж целых два. Это Бланш и Чешский пилснер. Соответственно в этих двух направлениях я решил покопаться в предстоящем году. Первым делом конечно же нужно обзавестись дрожжами.
Да, можно было бы попросить знакомых поделиться дрожжей из своего частного банка, но имея горький опыт решил заказать в интернете, за одно разнюхать что там, и как. Обязательное условие для покупки - это должна быть настоящая лаба, а не просто лендинг условного ДомЖивовара, МирДыра и иже с ними.
Беглый поиск по интернету и по пивоварским чатикам сузил круг до двух контор - Биргеномикс и АСП. Также в чатах узнал массу интересной информации касательно конторы АСП. Столько хейта я слышал разве что в адрес Владимира Фёдорова (имя ессесно изменено). Ну и как вы наверное уже догадались купил я дрожжи в Биргеномиксе.
Да конечно же нет, ёптать. Я готов был переплатить, но заказать дрожжи именно в ASP)). Видосы с кисельным стартером меня просто подкупили. Глядишь и мне чего-нибудь перепадёт.
Решил сделать полный обзор на эту контору: проверить живы ли дрожжи, попробовать их на вкус и цвет, снять показания… короче будем трогать их за всякое.
Буду расставлять плюсы и минусы, а потом посчитаем баланс. Самое интересное, что пока я никаких результатов не знаю, единственное я уже получил посылку и вот-вот приступлю к апробации полученного.
А начну обзор, пожалуй, с сайта.
Сайт
При беглом осмотре сайта сразу вылезли косяки. Ну вот например:
Как-то я искал в продаже YPD. В поиске мне вылазило все что угодно, кроме АСП. И пусть они не хотят платить за таргет, но почему на сайте я не могу понять, за что с меня просят 250 руб. 00 коп.?
Плашка не кликабельна. Можно лишь «Купить».
И только отмотав ниже можно найти подробное описание, перейти в пдф и там найти, что это писят грамм на литер воды. Дико неудобно!
Вкладка с дрожжами - это длинная сопля которую сидишь и катаешь. Не люблю такие. С другой стороны есть разделение на эли, лагеры, квейки и тд. А главное указаны аналоги. Визуально отбивается и хорошо. Дрожжей не так много, чтобы делать поиск, категории и группы, и потом выводить все на отдельной странице. Короче (+) и (-)
А вот с табличками самих дрожжей творится полная дичь.
Потерянные буквы, разное форматирование текста, отсутствие единой формы характеристик, внезапный переход на англицкий, да еще и местами капсом на тебя орет ФЛОКУЛЯЦИЯ. И все это безобразие умещается на одном скрине.
Ну какие нахер фаренгейты в Саранске, ребят?
Отсюда возникает вопрос: На кого рассчитано описание? То ли на нашего брата, то ли на заморского... Складывается ощущение, что таблички копипастил школьник откуда ни попадя, без понимания, что он вообще пишет.
Может я просто придираюсь? Да - большинство этого не видят и это моя проф деформация. Нет - сайт это единственный способ знакомства с компанией и можно сказать, её лицо. А весь этот хаус, а тем более грамматические ошибки не дают очков доверия продавцу, а наебарот отталкивает потенциального покупателя.
Это же не канал в телеге очередного ноунейма домашника, где очепятки и анекдоты лаконично дополняют друг друга.
Короче, нужно выработать единый формат и отредактировать тексты. Там работы на день в лучшем случае.
Господи, как же меня сейчас порвало с АТЕНУАЦИИ. За бортом 3 часа ночи, а я ору в голосину. Ща найду старый локальный мэмчик на эту тему.
Атенуация четыре, форматирование неуд, профессор лопух. Жииирный минус (-)
Заказ
А вот тут я вам скажу полный каеф. Я уж думал нужно будет пройти сотню регистраций, аунти… аунтинти.. тифи… короче проверок, что я не робот, созвониться с менеджером, услышать, что товар кончился, протух, идет по морю в контейнере, выставляйте счет, квитанцию оплатите в сбербанке и в августе месяце всё пришлем. Да не тут-то было. Я сам не понял как все быстро получилось. Нажал пару кнопок и вроде даже оплатил по куркоду.
В ту же секунду меня добавили в чат бот ASP и дали всю инфу по заказу со сроками и тд. Самовывоз Сдэк если что. Короче, тут просто красавчики. Люто бешено плюсую (+)
Общение с Прониным А.С.
Если кто не догадался, то это главный шеф АСП, инициалами которого она и названа.
... отслеживает негативные отзывы и комментарии в адрес своей конторы даже в чатах нижнего интернета. За это ему естественно плюс (+). Правда делает он это в своеобразной манере - эдакий вежливый лось)) со скепсисом и подколками, мол сами дураки. А вот за это ему бы многие заминусили, а я бы поставил ещё один плюсик. Почему?
Да потому, что отечественные чаты, не говоря уже про хоббитские без жёсткой модерации - это садомазо развлечение. Фразы «Помогите разобраться новичку...» и «...умники сраные» могут быть чуть ли не в одном сообщении.
В добавок некоторые завсегдатаи позволяют себе неоправданно грубое общение в чате, за которое уже бы в бубен выхватили. А к себе они требуют исключительно учтивого отношения, тем более от представителей разного рода контор. Ведь клиент всегда прав.
Отсюда, тонкий стеб и троллинг - это адекватное поведение ящитаю. До «пошебуршать в штанах» товарищу Пронину еще расти и расти. В любом случае он точно знает не только как правильно входить в хату, но и в чат домашников.
Вы можете с этим не согласиться, это ваше право. Подробнее раскрою свою мысль ниже.
Негативные комментарии
Еще немного порывшись в чатиках и почитав гневные комменты, я всё сильнее убеждался, что львиная доля из них не имеет под собой веских оснований.
Ну вот например человек сделал вывод, что дрожжи плохие, потому что стартер «плохо пахнет» или «пахнет серой». Кому-то не понравилась слишком маленькая или отсутствующая пена стартера и виноватый тут же был назначен - контора, и стартер отправился в каналью.
К слову, наличие или отсутствие пены в стартере связано с различными факторами, такими как плотность стартера, засев стартера (степень разбавления) ну и самих дрожжей.
Ну а что творят домашники со своими стартерами, так это вообще тема для отдельного юмористического журнала:
Жижу для стартера собираем из осадка бруха, а потом не кипятим. Оно же уже кипело!
Или вот: засунуть 3 пачки дрожжей в литр сусла и крутить их (внимание) 8 дней. Как вам? Нормуль?
Именно поэтому видосы с кисельными стартерами не могут лично меня убедить в том, что виноват именно поставщик, а не покупатель.
И вот глядя на подобные сообщения у более-менее знающего человека начинает бомбить, не говоря уже про особо приближённых к микробиологии.
Читая комменты пронина в чате я улыбался... улыбался солнышку. Надеюсь моя мысль понятна.
Самый частый коммент с которым не поспоришь: «Дрожжи не завелись». Одного такого человечка я помучал в личной переписке расспросами и выяснилось, что банка с дрожжами пролежала в холодильнике несколько месяцев, после чего дрожжи не завелись. Все остальное путано и непонятно, ну типа не завелись и всё, отправились в каналью. И тут я могу только развести руками.
АСП указывает надежный срок хранения дрожжей в 90 дней при 2-8 градусах, то есть в холодильнике [1]. А что с ними во время транспортировки происходит при 25, 30, 40 градусах? Правильно, они массово дохнут в страшных муках. Уайт пишет, что дрожжи не снятые вовремя из конуса могут потерять до 50% жизнеспособности в сутки, то есть может отмереть добрая половина биомассы [4, стр 120].
Однако дрожжи снятые из конуса и дрожжи приготовленные в лабе на YPD (как заявляют АСП) это две большие разницы. На богатой питательной среде клетки накапливают большое количество гликогена и других веществ, что позволяет этим откормленным слонякам лучше переносить стрессы, в частности высокие температуры хранения при транспортировке.
Кстати, на сайте АСП так же указано, что для повышения жизнеспособности они добавляют в дрожжи «Ковелос», что по результатам их исследования дает очень хорошие результаты в плане жизнеспособности. Якобы дрожжи с Ковелосом через 40 дней хранения (при температуре 24 градуса) из 40 млрд клеток жизнеспособных осталось 34 млрд, против 28 млрд в контрольном образце без добавок. Это 79% против 65%. Про такие свойства Ковелоса я слышу впервые. Звучит красиво, но верится с трудом.
Короче, мне сложно представить, чтобы за неделю доставки культура могла полностью обнулиться. А вот если такую уставшую культуру оставить еще на несколько месяцев в холодильнике то возможно всякое.
Из личного опыта
Однажды Миша Адольф заслал мне пару своих склянок с дрожжами и маленькую преформу с суспензией со стартера. Я не знаю, что пошло не так, но в одной из банок не было колоний совсем. И вообще в ней агар превратился в кашу.
Может он недоостудил петлю или вообще забыл посеять дрожжи на агар, я не знаю. Но предусмотрительно он положил в посылку преформу с "проблемным штаммом".
Как видите, даже такой опытный дрожжевод как Миша был удивлен, что стартер бродил без пены. И дрожжи не из хухры-мухры, а из самих WhiteLabs. Как ни странно дрожжи из преформы завелись и служат мне по сей день. К сожалению, мой отзыв о дрожжах, так и не дошел до адресата. До сих пор не верится. Светлая память...
Аккумулятор холода в посылке.
У АСП есть опция: за доп прайс вам могут положить аккумулятор холода. Любой каприз за ваши деньги. Вот только сами асп в своих статьях прямым текстом пишут, что всё это шляпа фетровая. Да и без статей любой человек, кто хоть раз использовал аккумулятор холода в купе с термоконтейнером знают, что вся эта бодяга работает максимум в течении суток, а по хорошему не более 12 часов. И при доставке в 7 дней этот аккумулятор - просто балласт. Не тратьте деньги.
Гарантия
По словам самого Пронина при обращении в компанию в случае нештатных ситуаций они высылают новые дрожжи бесплатно.
Товарищ Тиранус в одном из чатов писал, что ему вернули деньги когда «не завелись».
Другие достоверные источники описывали случаи игнора рекламаций.
В общем информация противоречивая, тут я сказать ничего не могу, поэтому без оценок. Если столкнусь с гарантийным случаем - дополню.
Ценообразование
Я как то сразу не увидел, что есть возможность выписать дрожжи не только в преформе, но и на уклоне. Однако не понял почему уклон стоит 2500 руб, что в пять раз дороже преформы? На мой взгляд ценник серьезно завышен. Примерно в пять раз.
А вообще есть очень удобный формфактор под названием Grand Slant. Это уклон в 250 мл склянке. Как раз Миша отправлял дрожжи таким форматом.
Короткая ремарка. Дрожжи на агаре чилят у меня на стеллаже месяцами и им ничего не делается. Разрастаются огромными колониями, жрут потихоньку и не жужжат. Главное герметизировать чашку чтоб агар не высох. Собственно доставить уклон с живыми дрожжами можно без проблем в любое время года, за исключением зимнего периода с сильными морозами.
Вместе со склянкой можно предлагать за доп кост банку со стерильным суслом для «первого шага» стартера. Записать мини ролик длительностью 2 минуты, как всем этим добром пользоваться и в чем его преимущества, и я думаю количество заказов бы увеличилось, но зная нашего брата количество хейта это вряди уменьшит.
Ключевое: по словам самого Пронина работают они с домашниками на чистом энтузиазме, а не наживы для. Нет желания заниматься розницей в серьез и надолго, как мне кажется. Короче, тут заминусим немного, как минимум за две пятьсот (-)
Зарубежный опыт
Немного отвлечёмся и посмотрим чё там у клятых супостатов. Контора Wyeast отправляет дрожжи в специальном пакете, который носит название Activator Smack-Pack System™.
Суть данного пакета заключается в следующем: Есть основной пакет в котором находится суспензия дрожжей. Помимо этого внутри основного пакета есть еще одни маленький пакетик с концентратом сахаров и питательных веществ.
Перед употреблением дрожжей нужно лопнуть маленький пакетик, чтоб высвободить его содержимое. Дрожжи начинают потреблять появившийся субстрат, далее начинается брожение, пакетик вздувается и сигнализирует о том, что пора переносить дрожжи в пиво/стартер.
По началу я не придавал этой технологии большого значения, мол, и так делать стартер, зачем переплачивать за нанотехнологии. Но владельцы конторы считают иначе.
Чтобы обезопасить свое честное имя от криворуких домашников, они сознательно пошли на этот шаг. Если суспензию после такой активации задать в стартер с небольшой контаминацией, то активные дрожжи задавят конкурентов, что в свою очередь, увеличит количество успешных варок. И наоборот - утомленные дрожжи будут стартовать ооочень долго и при малейшей контаминации варка будет испорчена.
Можно считать, что данная технология - это первый шаг стартера (самый важный), который проходит в абсолютно стерильных условиях.
Ну а после просмотра этого видео владельцы компании Wyeast однозначно осенили себя крестным знамением.
Для тех кто без ВПН краткий пересказ видео.
Некто Кловхаммер выпустил «обучающее» видео как правильно сделать стартер за 10 шагов без смс и регистрации. На протяжении всего ролика автор безостановочно пшикает, пшикает, пшикаем известным мыльным средством из брызгалки. По его словам он делает «санитайз».
Остужает сусло и задает дрожжи в колбу, которой он таким же макаром сделал «санитайз». Надевает стильную перчатку модного черного цвета и ей тоже делает «санитайз».
Затем он рукой в этой перчатке затыкает колбу с суслом и дрожжами, и яростно трясет.
Сначала я подумал, что он делает «аэрэйшн», но, как говорят классики: «Не стоит недооценивать предсказуемость тупизны». Прислушавшись я таки смог разобрать, что цель сей операции - смыть остатки суспензии со стенок колбы, чтоб добро не пропадало. «За всё уплочено», сами понимаете.
Всё это дело он транслирует на аудиторию в 160к человек. Не хило. Имеет ли такой способ право на существование? Конечно имеет.
Если этот чел чистюля по жизни, то у него, я думаю, всё в порядке. Уверен, что даже призы на конкурсах получает. И вы тоже можете следовать его примеру, но только при одном условии: в случае возникновения сопливого стартера не орать по всем углам, что вам какая-то контора говна прислала. И я даже не буду оставлять ссылки на самого себя, где немножко проясняю, что может пойти не так.
Ну-с... «вернемся к нашим баранам».
Ууууунбоксииинг
Обычный пакет с пупыркой. Внутри две преформы в дрожжами. Этикетки правда очень не стойкие, поэтому я сразу продублировал штаммы на крышках самым злоебучим маркером.
Собственно, всё, что мне требовалось от посылки это наличие хотя бы одного миллиончика, а лучше миллиардика живых клеток. В том, что они там будут я не сомневался.
Во-первых погода выдалась подходящая - около нулевая.
Во-вторых посылка шла всего около недели. А вот если заказывать летом в жару или в сильный мороз, то тут уже есть нюансы. Про это мы уже поговорили.
Со своей стороны я хорошенько подготовился ко встрече таких дорогих гостей: пробирки, чашки, уклоны.
Первыми открыл лагерные дрожжи AL407. За время пути они слегка добродили и при вскрытии на меня набросился дерьмодемон. Зафаршмачил мне весь стол и руки. Ну ничего, бывает. Протирайте шпириком баночки перед вскрытием.
Переношу культуру на уклон, затем в пробирку с суслом и потом немного размазываю по чашке. Со второй колбой AL204 повторил тоже самое. Там обошлось без эксцессов.
Дрожжи оказались живее всех живых. В пробирках они активно бродили уже через 8 часов.
На чашках картина схожая. Сплошной рост на вторые сутки, не смотря на деление (ужасным) истончающим штрихом.
С чашек я возьму еще одну копию уклонов для подстраховки. Преформы тоже оставлю в холодильнике. Что-то мне подсказывает, что они оживут и через пол года и через год. Если не забуду, проверю. Ставлю по плюсику на каждый штамм за то что «завелись». (+)(+)
Мазок на глисты
Проверить дрожжи на чистоту я бы и рад, но не могу. Сделать это мне не позволяет моя недостаточная компетентность в этом вопросе. К тому же, даже если бы мне и удалось что-то там найти, то не факт, что это не моих кривых рук дело. На этот счёт есть очень хорошая присказка:
Если сам сорвал резьбу, то руки из жопы, а если батя, то резьба китайская.
Многие хоббиты лихо примеряют на себя батину тельняшку и в случае одного единственного факапа оглашают свой безапелляционный приговор.
Иными словами проверить культуру на чистоту может только специально обученные человек, который много лет гнет хребтину в лабе.
Тем не менее у меня есть определенный опыт выявления чужеродцев на чашках петри, и я буду развлекаться, держа в уме, что результаты мы во внимание принимать не будем.
Я не придумал ничего лучше, чем высеять отбродившее сусло из пробирок на чашку. Несколько раз я показывал, что контаминанты разительно отличаются от дрожжей своими колониями. В густой суспензии их обнаружить просто не реально. А вот в уже отбродившем сусле шансы кратно возрастают.
Всякие баки очень плохо осаждаются и практически не флокулируют. Многие так и вообще подвижны и носятся по суслу взад-назад как ошпаренные. Поэтому:
Пробирки убираем в холодильник и осаждаем дрожжи как следует. Пипеткой сеем жижу на чашку. По 200 мкл на чашку.
Я внимательно просмотрел все колонии. Никаких признаков иноагентов не выявил. Все колонии очень похожи на дрожжевые, и друг на друга.
Как я уже говорил ранее, это не доказывает, что дрожжи на 100% чистые. Для этого нужны специальные среды и навыки. Например диастатики, или другой культурный штамм вычислить крайне сложно, а порой невозможно.
Кстати
Снова хочу отвлечься на наших, теперь уже заокеанских друзей получается (дописываю месяц спустя), и рассказать вам одну историю.
В 2016 пивоварня Left Hand подала в суд на контору Кристьяна Белого за то, что они поставили им дрожжи с диастатикусом. Банки и бутылки с их очень популярным сортом Milk Stout Nitro, стали адово взрываться у потребителя и пришлось отзывать продукцию на два мульона. [3]
Крис в свою очередь всё отрицал, говоря, что они проверяют свои дрожжи по 61 показателю и ни разу не встречали подобных проблем. Ну ещё бы! По такому случаю предлагаю сделать стикер с конторой WhiteLabs. А то, что они там себе думают...
Если кто не понял, то я поясню. Даже именитые лабы иногда обсираются (а не только наши), и даже сухари иногда не заводятся, хотя в сроке годности. И кто в итоге виноват установить крайне сложно. Главное запомнить одно - если у тебя стартер пошёл киселём, то виновата лаба сто проц).
Вангую: многие сейчас подумают, что я вообще все сообщения о заражениях списываю на домашников, и как-то прям откровенно отмазываю АПС. И я вам таки отвечу - ДА (нет). Я начитался в чатах всякого. Есть люди у которых 4 или 5 варок подряд в пиве появляется медсестричка, при этом всё разное - и дрожжи и хмель и засыпь. Как вы думаете, все эти пять раз человеку попадались зараженные сухари?
Другое дело ежели про такое пишет авторитетный, или я бы даже сказал "профессиональный" домашник. Но и на старуху бывает проруха, согласитесь.
Согласно пункту первому статьи 56 Гражданского процессуального кодекса РФ бремя доказывания лежит на плечах обвинителя. Я\МЫ ЮРИСТ, ёпти)
А что тут у нас под мелкоскопом?
С момента получения посылки прошло чуть меньше 3х месяцев. Самое время проверить как там себя чувствуют дрожжики в преформе. Закинув немного суспензии AL407 под микроскоп с метиленовым синим я не поверил своим глазам:
Даже на вскидку процент живых клеток более 90%, что просто прекрасно!
А вот с гликогеном явные проблемы.
Слева дрожжи из преформы штамма AL407 срок 3 месяца при 4-8 градусов. Спарва дрожжи BF-16 из пробирки после 3х дней брожения и 2х дней при 4-8 градусов.
Окрашивание суспензии растовом Люголя позволяет определить наличие или отсутствие накопленного гликогена в клетках. Как видно дрожжи BF-16 очень темные, почти коричневые, что говорит о хорошем запасе гликогена и хорошей «живучести» клеток. Такие дрожжи будут хорошо переживать стрессы и лаг-фаза у такой культуры будет не долгой.
Дрожжи AL407 выглядят пустыми и прозрачными. Такие клетки будут долго отдупляться в новых условиях и некоторая часть из них просто погибнет под действием осмотического давления сусла. Не переживут стресса короче.
Итак, жизнеспособность (процент живых клеток) меня порадовала, а вот живучесть (запасы гликогена) оставляют желать лучшего. Ну оно и не удивительно.
Решил посмотреть что будет с трехмесячной культурой если ее держать при комнатной температуре.
Отобранную суспензию из преформы я оставил на стеллаже при комнатной температуре и стал считать клетки с промежутком 3-4 дня.
Про метод подсчета я подробно писал в предыдущей статье. Если коротко: 3-5 полей зрения с суммарным количеством клеток > 600.
Дальше я случайно вылил пробирку с дрожжами и эксперимент был прерван. Но по уже имеющимся данным я построил примерный график жизнеспособности.
Построив медианную линию я снова был приятно удивлен. На 40ой день получил примерно 65% жс. Это, конечно, не заявленные 79% с ковелосом, но и дрожжам уже 3 месяца. Я вертаю взад свой скепсис на счет ковелоса и исследования АСП. Еще один честный и заслуженный плюсик (+)
Контрольное сбраживание и цифры
К сожалению ни сбраживания, ни цифр сегодня не будет. Извините.
Помятую историю с курским солодом я решил не заморачиваться с цифрами. Они могут вовсе не отражать реальных способностей дрожжей.
Стартер без пены
Наконец-то решил сварить пивка чешскага «как деды варили». За одно сделать материальчик про отварки. И что бы в вопросе отварок поставить для себя окончательную точку, стартер я сделал не один, а целых два. Буду варить сплитом.
Для стартера я пособирал все оставшиеся бутылки с замороженным суслом и мне впритык, но хватило. Да, знаю что использовать сусло от стаута под светлое пиво не совсем правильно, но другого у меня нет, да и предполагалось, что отработка будет декантироваться, а стартер снова будет разгоняться остатками светлого сусла при +10 градусов за день до варки.
Подготовил сусло как следует и внёс в него суспензию из преформы. Чего добру пропадать? В преформе оставил четверть на эксперименты.
По прошествии суток стартер НЕ ЗАВËЛСЯ!!! смотрим фото
Никакой пены, сусло черное как смоль. Реально очучение, что ничего не происходит.
Сразу подумал, что это большая удача, и есть возможность наглядно показать как это бывает. С такими ситуациями я сталкивался не раз, и можно сказать уже собаку съел. Примерно такая картина будет до самого конца. Ну может появится небольшая пенка, и всё. При этом стартер наберёт биомассу.
Если стартер без пены через сутки вызывает у вас попаболь, вы теряете сон и кушать не можете думая, что всё пропало - просто выключите мешку на 2-3 часа, а потом включите. Если и в этом случае пена не поднимется, то это реальный повод начать переживать, но как правило пена появляется и поднимается под самое горло.
Я конечно знатно затупил и не снял видео. Ниже фото сразу после включения мешалки. Сусло не крутилось перед этим 3 часа.
Через 15 минут после включения мешалки пена снова спала, но не полностью.
И примерно в таком состоянии осталась на следующие 24 часа, после чего окончательно спала. Сусло стало коричневым:
Тут множество факторов. Один из главных - это штамм дрожжей. Второй фактор - это состояние культуры и ее норма задачи. Если дрожжа ослаблена и её мало то УК выделяется постепенно и как бы размазывается на всём протяжении брожения стартера не вызывая сильного пенообразования.
К примеру W68 у меня всегда пытаются сбежать из колбы, при любом засеве. Ну вот такие они.
Лагерные штаммы часто не образуют пышной пенной шапки в стартере. Даже если делать стартер по шагам с разбавлением в районе 10х.
В случае же с жидкорями из лабы добавляется еще один фактор - среда выращивания. Как правило для наработки биомассы используются «богатые среды», например YPD. Это дрожжевой экстракт+пептон в качестве аминокислот и минералов, и декстроза в качестве основного источника углеводов. После такого пиршества дрожжам требует больше времени, что бы перестроится на потребеление более сложных сахаров (мальтозы) и время лаг-фазы сильно увеличивается.
Ну представьте, что у вас есть два-три поколения зумеров, выросших на смузяках и грибных гозе и вы такие: «Так всё ребят, с сегодняшнего дня только Хадыжи!». Само собой ребятки по начале будут жалом вертеть, ну а потом полетят как за здрасти и Хадыжи, и папироськи вместо айкоса.
Короткая инструкция для тех, кто не хочет потерять свои деньги
Подводим итоги
Ну что, давайте подсчитаем баланс.
У меня получилось 6 плюсов и 3 минуса.
А вообще, если так разобраться, то основной задачей АПС было отправить мне живые дрожжи, которые лично я получил в лучшем виде. Всё остальное - это быстро устранимые мелочи - доработать немного сайт, и возможно пересмотреть ценовую политику на уклоны.
Как вы понимаете это мой личный опыт и мой личный отзыв.
В общем, Ваша Честь, твердо и четко, АСП носит почётное звание «конторы пдрсв» абсолютно незаслуженно!
Отзыв проплачен!
Да, дороги мои друзья. А как вы хотели? Работа адвоката должны быть оплачена! И она таки оплачена… вашими лайками и огоньками! А представляется как бы я расчехлился если бы, например, товарищ Пронин занес мне хотя бы 50 рублей. Пусть даже бонусами сберспасибо)).
Выводы:
Наверное, случайный домашник, прочитав этот текст просто пошлёт меня нахрен со всеми уклонами, чашками и прочими горелками. Он заплатил деньги и хочет, чтоб дрожжи как минимум завелись и сбродили. И наверное он по своему прав.
Работа с жидкими дрожжами несколько отличается от привычных сухарей. Если вы не готовы тратить свое драгоценное время на склянки с пробирками, а стартер для вас - это какой-то непонятный гемор, то лучше продолжать пользоваться сухарями.
К слову, существует определенный миф, что жидкари намного лучше сухарей. Ящитаю, что это не совсем так. На сегодняшний день в продаже огромное количество «сухих» штаммов, способных закрыть практически любую задачу.
Многие мелкие и не очень крафтовые пивоварни работают с сухарями и имеют большой успех. Запытав до смерти одного крафтовика я с удивлением узнал что пиво, которым я восторгался и восторгаюсь по сей день сброжено самыми обычными сухарями, которые без дела валяются в моей морозилке годами.
С другой стороны, если вы выросли из доступного ассортимента сухих дрожжей и хотите попробовать вообще всё, что только есть по конкретной теме, то стоит немного углубиться в понимание работы с микроорганизмами и наработать минимальные навыки. Это сэкономит ваши деньги и нервы. К тому же это чрезвычайно интересно, увлекательно, и на несколько шагов приблизит вас к званию «Задрот Года».
Концерт окончен. Спасибо, что дочитали до конца.
[2] https://profibeer.ru/beer/29773/
[3] https://profibeer.ru/tech/brewing/36171/
[4] Yeast : the practical guide to beer fermentation, Chris White, Jamil Zainasheff
Часть вторая. Заражение
С появлением микроскопа мой интерес к микроорганизмам стремительно возрос. Очень сильно захотелось посмотреть на всякие баки, чтобы иметь представление как они выглядят и как их выискивать потом в пиве или дрожжах.
Решил начать с лактобактерий и ранним субботним утром собирался рассеять на уже приготовленные чашки с картофильно-лактозным агаром (далее PLA) немного колбасных стартовых культур.
Но перед этим мне нужно было задать лагерные дрожжи в стартеры, о которых я писал выше. По моим правилам техники безопастности (а точнее здравого смысла) сначала делаем чистую работу, а потом грязную. То есть сначала стартер, потом можно и с лактами порешать.
Я был уверен, что дрожжи в преформах абсолютно чистые. На чашках я не заметил ни малейшего криминала, который бы мог посеять во мне даже тень сомнения. А я человек придирчивый в этом плане. К тому же, в преформу я лазил лишь единожды, в самый первый раз, когда отбирал культуру на уклоны, чашки и пробирки.
В общем отлил в стартеры суспензию из преформы, потом немного отобрал в пробирку на микроскопирование (о чём тоже писал выше) и оставил в преформе примерно четверть на всякий пожарный.
PLA для меня «неизведанный зверёк» и было бы не плохо посмотреть, что будет с дрожжами на такой среде. По идее дрожжи там расти не должны, так как в среде отсутствуют нужные углеводы, а только лишь лактоза.
В общем мне подумалось, что прогнать на этой среде оба штамма от АСП в качестве теста будет совсем не лишним. Сказано сделано.
Когда работа с дрожжами была закончена, я достал пачку стартовых культур, обводнил грамульку и сделал посев.
Рост на PLA
Вопреки ожиданиям дрожжи таки растут на этой среде, но делают это крайне медленно. То что вырастает на сусло-агаре за 2-3 дня тут растет неделю или дольше. В картофильном отваре содержится совсем немного глюкозы, но этого хватает для роста дрожжей.
По началу мне казалось, что мелкие колонии с одной стороны чашки отдают какой-то синевой или, я бы даже сказал, голубизной. Но, видимо, зная, что в нашей богоспасаемой такие движения порицаются, и вообще записаны в экстремистские, через неделю голубизна пропала. Я списал это на "эффект среды" или на рефликс от черного маркера.
Что же касается стартовых культур, то там рост мне показался еще медленнее. Совсем маленькие колонии. И тоже был какой то голубой отлив у прозрачных колоний. Сразу фотографировать я не стал, но вы увидите всё позже.
В какой-то момент я даже забыл про эти чашки, уж очень скучно там всё двигалось. Стартер был готов и на ближайшие дни намечалась варка. Статья была почти дописана, оставался незаполненным лишь блок про жизнеспособность.
Короче всё было просто песня, как вдруг, разгребая рабочее место на стеллаже мой глаз зацепился за чашку с дрожжами. Показалось, что некоторые колонии контаминированы, но так как дело было ночью решил отложить осмотр до утра.
Утром первым делом я начал разглядывать чашку. Рассеянный свет из окна дает очень хороший результат по выявлению инородцев и я им часто пользуюсь. Но тут тотальный ахтунг. Добрая половина колоний была просто в хламину.
Примечание: Чашку разделена пополам. На одну часть посеял 407 штамм, на другую 204.
Видите этот рыжий цвет? Некоторые колонии буквально на половину рыжие, некоторые имеют водянистый ареол вокруг.
Порывшись в телефоне я нашел макро режим, и это просто чудеснейшая функция которая впервые мне пригодилась в жизни.
Я думаю теперь каждый из вас видит, насколько всё плохо. А главное обратите внимание на мелкие прозрачные точки вокруг дрожжевых колоний!
Вот еще показательная фоточка:
Отчетливо видно как прозрачные колонии следуют по траектории штриха.
А вот фотки второй половины чашки, друго штамма АСП (204). Абсолютно чистый посев. Только дрожжи.
Увидев такую картину я естественно отложил варку до выяснения обстоятельств. Единственным логическим объяснением было то, что чашка была контаминирована во время розлива или посева и я растащил заразу вместе с суспензией дрожжей.
Включив комп и начав новый рабочий день я параллельно прокручивал варианты и не придумал ничего лучше, чем посеять пипеткой немного стартера на PLA, засунув чашку в термостат при 37 градусах. Дрожжевого роста там не будет, ибо дрожжи лагерные и если что-то и вырастит... то алес. Уже через 20 минут я стоял на кухне и готовил новую порцию PLA. Работа не волк, сами понимаете.
Еще через пару часов я сделал посев, кинул чашку в термостат и спокойно отправился работать.
Через двое суток всё встало на свои места:
К этому моменту на чашке вылез настоящий пивной триппер и стал прогрессировать. Экспериментируя с чашкой я нашёл еще лучший способ для визуального анализа колоний - через свет фонаря в темноте.
Сверху чистый посев (штамм 204), снизу видно те самые голубые отблески колоний и мелкие точки по штриху (штамм 407).
Тильт
[Минутка самобичивания, можно не читать]
Вы даже представить не можете как меня накернило в этот момент. Кааак? Как я мог не видеть такой жести?
Перечитывая статью (которая теперь первая часть) меня немного подташнивало от самого себя. Это же какой-то позор!
В очередной раз я получил полбу и моя корона с грохотом укатилась за диван.
И знаете, к сорока годам я оброс не хилой такой бронёй от сторонней критики, и любой хейт максимум может вызвать у меня улыбку. Работа такая - день ото дня слушать критику. И даже если бы я понял, что прилюдно наделал в свои шаровары, то просто написал бы опровержение, всего-то делов.
Но вот что делать с внутренним критиком, которой внимательно следит за каждым словом и каждой буквой? И в тот момент он, с.ка, просто ликовал: «Ну что, микробилог мамкин, ахахах, иди анекдоты придумавай!!!»
Казалось, что у меня вообще всё пиво заразное, а все уклоны кишат баками. И я даже стал нервно почёсываться, как при педикулёзе. Пришлось провести небольшую ревизию.
В этот раз у меня не было моральных сил придумывать какой-то план действий. Я просто решил высеивать всё что у меня было на различные среды и уже после попытаться понять, что за нах.
И что бы не запутать вас, давайте я напомню, что у меня было в наличии:
- исходные дрожжи в преформе (исх)
- уклон с копией исходных дрожжей (ук1)
- пробирка с отработавшей исходной культурой (пробирка)
- уклон с отобранными колониями из чашки петри (ук2)
Посев №1
Я показываю вам фото, а вы сами определяете где вы видите голубых, а где нет. Чашка одна и та же, но под разными углами света. Сегменты пронумерованы.
Сегменты «1» - уклон с копией исходника (ук1). Сегменты «2» - уклон с чашек (ук2).
Лично я вижу голубизну только в ук1.
Отобранные мной колонии из чашки петри без признаков заражения. Это радует.
Посев №2
Решил посмотреть сусло из стартера на картофильно-декстрозном агаре (среда PDA).
Картина несколько другая - мощный рост дрожжей и совсем мелкие прозрачные колонии. Их почти не видно невооруженным глазом.
Я решил пересеять их (прозрачные) на чистую чашку PDA. Спустя несколько дней никакого роста я не наблюдал. Но это лишь на первый взгляд. Фонарик и макросъёмка показали мне этих мелких ублюдков.
Крупные точки - это конденсат и пыль на крышке, а вот мелкий млечный путь - это ано, то самое. И если внимательно присмотреться то можно увидеть радужный отблеск (запрещенный на территории РФ).
Под микроскопом они выглядят примерно вот так - палочки и точки.
Посев №3
Далее я сделал посев на PLA жижу из пробикри пипеткой 200 мкл. Конденсат испортил результат размазав по чашке колонии, и я собирался переделать всё заново, поэтому не фоткал чашку.
Но сколько бы я не смотрел на неё никакой голубизны я не видел. Отобрав семплы из 3х произвольных мест во всех трех случаях там были только дрожжи и больше ничего.
Промежуточные итоги
- Исх - присутствует контаминация баками
- ук1 - присутствует контаминация баками
- ук2 - только дрожжи
- пробирка - только дрожжи
- стартер (из исходника) - присутствует контаминация баками
Ну окэй... предположим, что с чашки я отобрал чистые колонии, но как быть с пробиркой? Если дрожжи были контаминированы изначально (в АСП), то в пробирке они тоже должны быть, потому что они есть в стартере.
Посев №4
На этот раз высеваю жижу из пробирки на PDA не пипеткой, а петлей, и контролю посевом из исходника (преформы) на одной чашке. Инкубирую при 37 градусах. Дрожжи расти не будут и я буду видеть только контаминацию
Через трое суток вижу вот такую картину:
Да ну ёптуюмать! Это прикол какой-то или где??
Для тех кто не понял: Из пробирки густо растут элевые/дикие дрожжи. В исходнике тоже есть 2 элевые колонии и куча мелких неопознанных.
2 - бактерии, 3 - бактерии, 4 - дрожжи + бактерии
- Исходник контаминирован не только баками, но еще и дикими/элевыми дрожжами.
- В пробирке только контаминация элевыми дрожжами и нет никакой бактериалки.
Тут у меня пригорело окончательно. Я вообще перестал понимать суть происходящего. Такой разброс контаминантов, а главное их отсутствие в разных отборах говорят о моей полной профнепригодности! Но это не точно.
Посев №5
Посев ук2 (колонии отобранные с чашки) и контролю исходником (преформа). Инкубирую при 37+ градусов.
Ну хоть здесь спасибо. Уклон чистый как в плане бактериалки так и в плане диких/элевых дрожжей. На исходнике снова вылезли дикие/элевые дрожжи и баки
ИТОГО
В принципе я бы мог уже сейчас обвинить АСП в том что мне прислали грязные дрожжи. Но совесть дороже.
Проведя множество посевов, не только дрожжей из АСП, но и из своих старых уклонов, я смог составить примерное представление о своих навыках работы.
Для справки: За прошедший год (с января по январь) я пролил примерно 150 чашек петри. Не знаю много это или мало. Процент контаминации чашек при розливе порой доходил до 80%. То есть из пяти чашек после розлива я однажды выбрасил 4. На них после 3-4 дней «просушки» появлялась плесень.
Достаточно быстро удалось снизить этот показатель до 5-10%, то есть 1-2 чашка в помойку на 15-20. Розлив оказался самым сложным этапом в принципе. При дальнейших посевах-пересевах я запарывал работу всего три или четыре раза за всё время.
Сейчас я проливаю по 30-40 чашек в месяц. Процент контаминации при розливе остался таким же, может немного вырос. Такой поток заставил перейти на одноразки, использовать новые техники для большего контроля - посев сегментами, контроль другими штаммами, работа с чашками вверх дном и тд. Ну и плюс микроскоп сильно облегчил работу и показал, как выглядят иноагенты.
Так вот, по странному стечению обстоятельств такое мощное бактериальное заражение выявлено только в этой проблемной преформе и образцах, взятыми из неё. Проверить удалось пока не все мои уклоны, но как минимум лагерные штаммы, включая высеенные мной из крафтового пива, не показывают наличия какой-либо сторонней микрофлоры.
Многочисленные повторения раз за разом давали одинаковый результат: Набор контаминантов оставался одним и тем же. Ничего не пропадало и не появлялось.
- Исх (преформа) - контаминированы дикими/элевыми дрожжами + бактериалкой (в 5и посевах)
- Ук1 - контаминирован только бактериалкой (в 3х посевах)
- Пробирка - контаминирована только элевыми дрожжами (в 5-и посевах)
- Ук2 - абсолютно чист и свеж как майский день. Только лагерные дрожжи. (в 3х посевах)
Есть лишь одно логическое объяснение которое мне приходит в голову, и что бы было совсем понятно нужны дополнительные пояснения:
Перед вскрытием преформу я протёр спиртиком. В момент вскрытия произошёл гашинг с выбросом части суспензии наружу. Дрожжа текла по моим рукам, капая на стол. Поняв, что в таких условиях я не смогу нормально работать, я дал полностью стечь излишкам суспензии с отвинчинной крышкой. После чего закрутил крышку, промыл всё под проточной водой и снова протер спиртиком.
Процесс отбора происходил одинаково для обоих преформ - крышка откручивалась почти до конца, преформа устанавливалась в штатив, прокалённой петлей отбиралась культура, лишь на секунда приоткрывая крышку, и снова возвращая её на место. Все работы вблизи горелки.
В какой последовательности я отбирал материал сейчас не могу точно сказать. Возможно так как описано в первой части - ук1, пробирка, чашка. Но может и в другой. Я не придавал этому большого значения.
Вариант №1: Я контаминировал преформу сам.
Все эти протирания дезинфектантами, конечно, дело хорошее, но положа руку на сердце это сродни прикладывания подорожника к открытому перелому.
Я предполагаю, что произошел контакт суспензии с загрязненой поверхностью внешней резьбы крышики, и по мере отбора материала (открывания-закрывания крышки) я добавлял всякой дичи в преформу. Отсюда и разный набор микроорганизмов в разных отборах. В ук1 попали только баки, в пробирке оказались только дикие дрожжи, а в чашке...
А в чашке наблюдался активный мощный рост культуры и незначительная контаминация просто осталась где то в гущще колоний. Отобранные мной единичные колонии с чашки остались чистыми.
Соответственно, преформа имеет полный букет.
Вариант №2: Контаминация в АСП только элевыми дрожжами.
Конкретный перекарбон в одной перформе (проблемной) наводит на нехорошие мысли: преформа была контаминирована уже в АСП дрожжами, которые техонько дображивали. Дальше по выше описанному сценарию я контаминировал преформу, но уже баками.
Но почему тогда нет элевых дрожжей в ук1?
Сначала я думал, что не мог. Но повторный анализ фотографий показал, что элевые дрожжи в исходнике проявлялись от одной до пяти колоний, то есть 1-5 клеток на объем петли (примерно 10 мкл). Собственно шанс не зацепить их петлёй очень даже высок.
Ну и ещё вариант: Я просто вожу вас за нос. Сам заразил специально, что бы хайпануть на теме в ожидании лайков, репостов или чего там ещё. На вашем месте я бы это не исключал.
Какой из этих вариантов правильный я понятия не имею. Со своего микробиологического дивана я благословляю вас определиться самим.
Буду ли я писать рекламацию в АСП?
Конечно же нет. Свои мысли я описал выше. К тому же чистая культура у меня осталась в ук2.
Более того. Я бесконечно благодарен сложившейся ситуации, ибо за короткий срок я мощно пропушил свои скилы.
Возможно про этот зараженный штамм будет еще один постик про расчистку, но он будет доступен только тем, кто поставит очкарика или огонёк в телеграмм канале липкие тапки. Не зевайте. Если наберём хотя бы 1000 очкариков... нет, 1000 мало. Давайте 10 штук и я точно напишу серьезный пост с актуалочкой.
Выводы:
1) Моя корона снова на месте. В первоначальном тесте (из пробирки) бактериальное заражение не проявлялось, ибо его там и небыло. Поэтому моя совесть перед читателями чиста.
2) Как вы могли заметить я удалил один блок из статьи. Удалил, потому что в неумелых руках он приведет к еще большим проблемам. Мои руки-крюки тому наглядное подтверждение.
3) Заказывая жидкую культуру будьте готовы использовать ее сразу. Сразу означает, что у вас в запасе есть только одно вскрытие преформы, после чего вы должны сделать стартер и засеять эти дрожжи в батч. В таком случае у вас минимальные шансы на провал.
4) Перед вскрытием преформы снимайте с нее этикетку и топите эту муму в дезинфектанте на пару часов, а лучше на сутки. В спирте/перекиси/нуке, что там у вас есть самое забористое?
5) Если боитесь отсутствия пены в стартере, то делайте стартер по шагам с перезасевом. Это снизит риски и даст пенный стартер.
6) Ну и главное: контаминировать дрожжи/стартер/сусло можно легко и непринужденно.
Портал в Ад объявляется открытым
Переходим в комментарии в тг канала и пишем там о своём неудачном (или удачном) опыте работы с отечественными дрожжевиками. Будет интересно почитать.
Ну а если у кого-то найдутся силы признать, что он поторопился и зря слил в каналью беспенный стартер, то получит +100500 в карму, и год без кислых варок.(Не является публичной офертой)